人人 中华人民共和国医药行业标准 YY/T 0188.1~0188.11--1995 药品检验操作规程 Operating methods for the tests and assays of drugs 1995-07-11发布 1996-05-01实施 国家医药管理局 发布 YY/T0188.6—1995 前 本标准是依据《中华人民共和国药典》（1995年版），对ZBC10002一89《抗生素的原料药及其制剂 的生物测定法》进行修订的。 本标准对药品的异常毒性、热原、降压物质、无菌的检查法和微生物检定法，作了详细的说明与规 定，是统一药品检验操作的规范化工作指南。 本标准对原标准名称《抗生素的原料及其制剂的生物测定法》改为《药品的生物测定法》，以扩大适 用范围，并有如下较大的改动： 1.对热原测定用肛门温度计的校正，恒温水浴的温度由原标准要求精确三位有效数字，改为四位 有效数字； 2.对无菌检查法扩大了供试品范围； 3.微生物检定法增加了原料药及各类制剂的供试品溶液的制备； 4.对原标准附录A细菌内毒素检查操作法（补充件)转为正式标准细菌内毒素法： 5.删弃了原标准附录B青霉素酶及其活力测定法（补充件）、附录C卡那霉素中卡那霉素B检查法 （补充件）、附录D无热原注射用水的制备（参考件）及附录E生物检定统计几个概念及实例计算（参考 件); 6.增加了附录A抗生素标准品与理论值，对表1抗生素微生物检定试验设计表的有关内容作了修 订。 本标准从生效之日起，同时代替ZBC10002一89。 本标准由国家医药管理局提出并归口。 本标准起草单位：华北制药股份有限公司。 本标准主要起草人：于伯英、廖淑云、陈玉川、梁梅、孙卫。 本标准于1989年3月首次发布，于1995年7月第一次修订。 104 中华人民共和国医药行业标准 药品检验操作规程 YY/T0188.6—1995 第6部分：药品生物测定法 代替ZBC10002—89 Operating methods for the tests and assays of drugs Part 6:Biological assays of drugs 1范围 本标准规定了异常毒性检查法、热原检查法、降压物质检查法、无菌检查法及微生物检定法等操作 的要求。 本标准适用于对生物测定有控制要求的各类药品。 2引用标准 中华人民共和国药典（1995年版） 3异常毒性检查法 本法系将一定剂量的供试品溶液注入小鼠体内或口服给药，在规定时间内观察小鼠死亡情况，以判 定供试品是否符合规定的一种方法。 3.1试验方法 有静脉注射、皮下注射、胶腔注射及灌胃给药等方法。 3.2准备工作 3.2.1设备用具及用具的洗涤消毒 3.2.1.1设备与用具 a）消毒锅、鼠盒（罐）、试管架、秒表（记时器）、干燥器、分析天平、架盘天平、75%酒精棉球、玻璃棒、 镊子。 b）试管（22mm×190mm）、注射针头（4号、5号）、注射器（1mL）、吸管（1、2、5、10mL）。 3.2.1.2.洗涤与消毒 a）吸管、试管、称量瓶等，先用水冲洗，再用清洁液浸泡片刻，取出用水及蒸馏水依次冲洗干净，自 然晾干备用。 b）注射器及注射针头，用水及蒸馏水依次冲洗干净后，在蒸馏水中煮沸15min。注射针头每周用 2%碳酸氢钠溶液煮沸10min，后用水及蒸馏水依次冲洗干净后，消毒备用。注射器每周放入洗洁净等 去污剂中浸泡0.5h，取出用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗三次，消毒备用。 3.2.2试剂 75%酒精、灭菌生理盐水、酸。 3.2.3实验动物的准备 实验用小鼠，应健康无伤，毛色光滑，眼睛红亮，活泼，须在同一条件下饲养，同一品系，同性别，雌者 无孕，在称重前，自然饱腹，体重17～20g。做过试验的小鼠，不得重复使用。 国家医药管理局1995-07-11批准 1996-05-01实施 105 YY/T0188.61995 将称好体重的小鼠分别平均使用，每批供试品用5只小鼠，复试时用18～19g的小鼠，每批用 10只。 3.2.4供试品溶液的配制 除另有规定外，各类药品一般用灭菌生理盐水稀释至规定浓度。 3.3操作 3.3.1静脉注射法 3.3.1.1将各种试验用具及供试品溶液按一定位置安排在工作台上，鼠盒（罐）应标有供试品批号、日 期的标签。 3.3.1.2将注射器与注射针头配套后，用少量供试品溶液洗涤3次，弃去洗液，量取供试品溶液后，排 除注射器内的气泡，准确调至所需量。 3.3.1.3捉小鼠时，在其身后捏住尾巴提起放入固定器内，将其尾巴露在外，用左手的拇指及中指将尾 巴拉直，食指接在固定器上使小鼠固定。固定装鹭要注意通风，并使小鼠有活动余地， 使静脉扩张及消毒。 3.3.1.5在尾长近尾尖四分之一处用左手三指捏住尾巴，右手持注射器，即在捏住处用针尖与尾巴成 一适宜的角度（小于30）刺入静脉内，平行地推入少许供试品溶液。 3.3.1.6立即将注射器内栓平行推入，应在4～5s内匀速注入供试品溶液0.5mL，并记录时间。如注 射部位皮下发白且推入药液的阻力很大，表示针头未插入静脉内，若3次未注进或药液损失大于 0.02mL时，应另取小鼠注射。 3.3.1.7注射完毕后拔出针头，随即用左手拇指按注射部位，并轻轻揉压，使血液及溶液不致流出。 3.3.1.8立即将小鼠松开，让其在固定器内自由活动，以观察即时反应，并作记录。然后取出小鼠，放入 标明批号、组别的鼠盒内。 3.3.1.9照上法继续注射其他各小鼠。在每次抽取供试品溶液时，均须将注射器内的回血用少量供试 品溶液洗涤干净。 3.3.2皮下注射法 3.3.2.1准备工作、记录均同静脉注射法。 3.3.2.2左手抓住小鼠使它腹部向上仰卧，用拇、食、中三指固定其颈脊部，用无名指及小指固定尾及 后肢，右手用镊子取碘酒棉，擦拭小白鼠腹部，再用75%酒精棉擦拭其消毒。 3.3.2.3右手持注射器于小鼠腹部左侧皮下刺入，并针头在皮下平行通过腹部中线进入腹部右侧皮 下，立即注入供试品溶液0.5mL。 3.3.3腹腔注射法 3.3.3.1准备工作、记录、小鼠处理同皮下注射法。 3.3.3.2右手持注射器于小鼠腹部左侧皮下剩入，使针头在皮下平行通过腹部中线后，进入右侧腹腔， 立即注入供试品溶液0.5mL。 3.3.4口服给药法 3.3.4.1准备工作、供试品的稀释、记录同皮下注射法。 3.3.4.2右手持注射器（用9号注射针头），装上胃导管，缓缓伸入小鼠口腔至食道部，将注射器内栓缓 缓推入供试品溶液0.5mL。 3.3.4.3口服给药体积为1mL时，宜在小鼠空腹时给药。 3.4注意事项 3.4.1采用各种给药方法，在拔出针头时，如发现药液外溢较多时，此小鼠应废弃，另取小鼠依法操作。 3.4.2试验后待观察小鼠，喂养方法同试验前。 3.4.3试验用小鼠笼内数量不宜过多，避免影响试验结果。 136 YY/T0188.6—1995 3.4.4实验室和饲养室温-般控制在19～28℃。 3.5结果判定 除另有规定外，全部小鼠在给药后48h内不得有死亡。如有死亡时，应另取体重18～19g小鼠 10只复试，全部小鼠在48h内不得有死亡，为符合规定。 4热原检查法 4.1家兔法 本法系将一定剂量的供试品溶液，静脉注入家免体内，在规定时间内，观察家免体温升高的情况，以 决定供试品中所含热原的限度是否符合规定。本试验属于限度试验。 4.1.1准备工作 4.1.1.1设备、用具的清洗及除热原 a）设备与用具 电热干燥箱、分析关平、台秤或电子秤、免试验固定器、超净工作台、时钟、煮锅、肛门体温计、注射器 （2、5、10、20、30mL）、注射针头（6、7、8号）、吸管（1、2、5、10mL）、称量瓶。 b）清洗及除热原 1）玻璃器皿 少3次。 2）注射针头 用水冲洗后，在2%碳酸氨钠溶液中煮沸10~15min，用水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗至少 3次。 3）用具除热原 将冲洗干净的注射器、针头、称量瓶、玻璃小瓶置金属盒内，吸管置金属简内，放入烤箱，于 180200℃保温2h或250℃保温0.5h，放冷密闭备用。应在一周内使用，过期重新处理。 4.1.1.2试剂 75%酒精、甘油或凡士林、注射用水。 4.1.1.3供试验用动物一家免 a）供试验用家免应健康无伤，肛门正常，毛色光滑，体重1.7～3.0kg，摊雄皆可，雌者无孕，分笼饲 养。 b）试验前3日内体重无减轻者，经过预测，体温保持正常者。 c）新免的预选新免在测温前7日应用同一伺料饲养，开始预测体温，进行挑选。挑选试验的条件 与检查供试品相同，但不注射药液。测体温时，体温计或相应测温仪探头插入肛门的深度各免应相等，约 6cm。每隔1h测量体温1次，共测4次，体温均在38.0～39.6℃的范围内，且最高最低体温的差数不超 过0.4℃为符合规定，方可供试验用。 4.1.1.4供试品溶液的制备 a）供试品为原料药.则精密称定后，根据其效价或含量，用无热原注射用水稀释至规定浓度，进行 热原检查。 b）供试品为各类制剂，则先用碘酒棉或75%酒精棉擦拭容器开启部位或取供试品部位，然后按标 示量用无热原注射用水稀释至规定浓度，进行热原检查。 4.1.1.5试验动物的准备 a）试验用家免，初试3只，复试5只。试验前2h停止喂食，到试验完毕。 b）试验前预测体温2次，间隔时间30～60min，两次体温之差不得超过0.2C，以两次体温的平均 值作为该免的正常体温。 107 YY/T0188.6--1995 c）已用于热原检查的家兔，如供试品判为符合规定，至少应休息48h，方可供第二次检查用。其组 内升温达0.6℃的家免，应休息2周以