ICS 65.020.01 CCS B 05 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 4306—2026 羊草远缘杂交技术 规程 Technical code of practice for distant hybridization of Leymus chinensis 2026-02-10发布 2026-03-10实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 4306 —2026 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员 会（SAM/TC 19 ）归口。 本文件起草单位：中国农业科学院草原研究所。 本文件主要起草人：杨艳婷、武自念、田春育、宫文龙、刘乐萌、李志勇、娜娜、陈晓菲、李思玉、 李事超。 DB15/T 4306 —2026 1 羊草远缘杂交技术 规程 1 范围 本文件规定了羊草与其近缘种远缘杂交育种的程序、杂交亲本、花期调节、杂交、幼胚挽救、杂交 后代真伪性鉴定和杂交后代扩繁等要求和规范。 本文件适用于羊草与近缘种的杂交育种。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 远缘杂交 distant hybridization 不同种间属间甚至亲缘关系更远的物种之间的杂交。 近缘种 closely related species 同科或同属内亲缘关系较近、染色体存在部分同源性的物种。 4 杂交亲本 亲本本底调查 调查羊草远缘杂交亲本的遗传背景信息、产量、品质、抗性等特性，以及染色体核型、倍性、花粉 活力和柱头可授性等。 亲本选择 根据育种目标，选取生长状况良好、花粉活力高、柱头可授性强，优良性状突出，缺点少，且优势 互补的种质材料作为亲本。以羊草为母本时，优先选择亲和性高的新麦草、黑麦草等为父本；以羊草为 父本时，优先选择亲和性较高的小麦等为母本。 5 花期调节 生育期调控 DB15/T 4306 —2026 2 对于一年 生的小麦、黑麦草等杂交亲本，可在温室（ 3月初、 3月中旬、 4月初、 4月中旬、 9月初、 9月中旬）或大田（ 4月初、 4月中旬、 4月底）分批种植，使其与羊草花期相遇。 花期调控 对于多年生的羊草、赖草、新麦草等杂交亲本，可通过 0 ℃～4 ℃低温进行春化处理 7 d～10 d， 冬季在温室采用温度（ 18 ℃～25 ℃） 、光调控（ 16 h光照、8 h黑暗、光照度 5000 LUX ～8000 LUX ） 等措施，促使杂交亲本开花、花期相遇。 6 杂交 杂交植株选择 宜选择生长发育良好、健壮、无病虫害、具有亲本典型性状的植株作为杂交亲本。 母本去雄 宜选择晴天 9:00～11:00对即将开放的母本雌花序进行人工去雄，将雄蕊去除干净，注意切勿伤到柱头，在 3 d内完 成授粉。 授粉 6.3.1 花粉采集 选择健壮、即将散粉的父本穗子进行套袋，新麦草等近缘种 父本于11:00～14:00时采集花粉，羊草 父本于15:00～18:00时采集花粉。待花药散粉前，采集整穗的花粉，置于干燥、透气的硫酸纸袋中，作 上标记。采集的花粉在 6 h内完成授粉。 6.3.2 授粉方法 将采集到的父本花粉用毛笔蘸取、直接涂在去雄的母本雌蕊柱头上，重复 2～3次。 套袋标记 授粉完成后用硫酸纸袋将整个花序套入后固定，挂上标签。标签上注明杂交母本和父本、花序编号 以及杂交日期、地点、人员信息。 7 幼胚挽救 授粉后14 d～18 d膨大但尚未完全硬化（或颖果呈乳白色）的种子，经消毒后剥取幼胚，接种到 MS （Murashige and Skoog ）+GA3培养基上，诱导生长至完整植株后，经室内炼苗一周左右，移栽至大田。 8 杂交后代真伪性鉴定 利用形态学观察、分子标记技术、流式细胞仪倍性检测、核型分析等方法鉴定已移栽到大田中的植 株，鉴定其杂交后代的真伪性。 9 杂交后代扩繁 DB15/T 4306 —2026 3 利用组织培养技术将真实杂种后代的幼穗、茎等外植体接种到诱导愈伤组织培养基上进行愈伤诱 导、分化、生根培养至完整植株，或通过分蘖、根茎扩繁。