ICS07.080 CCSC27 中华人民共和国国家标准 GB/T47199—2026 己糖激酶活性及纯度检测方法 Assaymethodofhexokinaseactivityandpurity 2026-02-27发布 2026-06-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 原理 1 ……………………………………………………………………………………………………… 5 试剂或材料 1 ……………………………………………………………………………………………… 6 试验步骤 2 ………………………………………………………………………………………………… 7 质量控制 4 ………………………………………………………………………………………………… ⅠGB/T47199—2026 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国工具酶标准化工作组(SAC/SWG11)提出并归口。 本文件起草单位:华灿(厦门)生物医药有限公司、夏禾(深圳)生物技术有限公司、南京诺唯赞生物 科技股份有限公司、夏禾(广州)光电生物科技有限公司、广东丸美生物技术股份有限公司、武汉新华扬 生物股份有限公司、华慧海洋多糖生物技术(深圳)有限公司、武汉宏韧生物医药股份有限公司、深圳迎 凯生物科技有限公司、北京健平金星生物医药有限公司、申亚生物科技股份有限公司、江苏创健医疗科 技股份有限公司、美康生物科技股份有限公司、福建赛福安全技术服务有限公司、湖南尚成生物科技有 限公司、夏禾(杭州)生物技术有限公司、南生(厦门)分析检测有限公司、福建南生科技有限公司、大田华 灿生物科技有限公司、上海鹰姿生命科学有限公司、海南华研胶原科技股份有限公司、复旦大学、山东大 学、上海交通大学、苏州大学、福建农林大学、浙江工商大学、厦门大学、浙江师范大学、上海楚豫生物科 技有限公司。 本文件主要起草人:郑登忠、黄发灿、王翠、郭延巍、孙云起、潘威、徐丽、王双旭、张杨、张震、邹检平、 刘洪艳、储筠、刘敬喜、王欣、朱洪浩、赵子方、郑恬烨、黄恩铭、冯雁、钟江、陈秀兰、朱力、姚鹃、傅玲琳、 刘斌、张永有、赵超、杨忠华、邢志刚、潘排风、黄海燕、郑丽明。 ⅢGB/T47199—2026 引 言 己糖激酶(hexokinase,HK)是以己糖为特异性底物的六碳糖磷酸化酶,催化己糖的磷酸化反应,应 用于血糖和尿糖的检测及其检测试纸的制备。制定己糖激酶活性及纯度检测方法的国家标准,用以促 进生产和使用,对推动该类工具酶的产业化具有重要意义。 ⅣGB/T47199—2026 己糖激酶活性及纯度检测方法 1 范围 本文件描述了己糖激酶活性及纯度的检测方法。 本文件适用于己糖激酶活性及纯度的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T40174—2021 工具酶纯度的检测方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 己糖激酶 hexokinase 以三磷酸腺苷(ATP)作为磷酸根来源,催化C6位的D-己糖磷酸化反应的转移酶。 3.2 己糖激酶活性单位 activityunitofhexokinase 在pH7.6,温度25℃条件下,以葡萄糖为底物的己糖激酶催化下,每分钟生成1μmol葡萄糖-6-磷 酸所需的酶量为一个活性单位。 4 原理 葡萄糖和三磷酸腺苷(ATP)在己糖激酶的催化下发生磷酸化反应,生成二磷酸腺苷(ADP)和葡萄 糖-6-磷酸,后者再脱氢使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)还原为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷 酸(NADPH)。NADPH在波长340nm处有特异吸收峰,通过测定340nm处吸光度的增高速率可计 算出该酶的活性单位。 葡萄糖+ATP己糖激酶 →D-葡萄糖-6-磷酸+ADP D-葡萄糖-6-磷酸+NADP葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 →6-PG+NADPH 5 试剂或材料 5.1 水 符合GB/T6682规定的二级水。 1GB/T47199—2026 5.2 试剂A:50mmol/L三羟乙基胺缓冲液 称取4.64g三羟乙基胺盐酸盐(分析纯),用400mL水溶解,在25℃下用1mol/L盐酸调pH值 至7.6,定容至500mL。 5.3 试剂B:555mmol/L葡萄糖溶液 称取1gD-(+)-葡萄糖(分析纯),用试剂A溶解,并定容至10mL。 5.4 试剂C:19mmol/L5’-三磷酸腺苷溶液(ATP溶液) 称取1g5’-三磷酸腺苷(分析纯),用水溶解并定容至10mL。临用现配。 5.5 试剂D:100mmol/L氯化镁溶液 称取18.56g六水合氯化镁(分析纯),用水溶解并定容至500mL。 5.6 试剂E:14mmol/Lβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐溶液(NADP溶液) 称取0.107gβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐(分析纯),用冰预冷的水溶解并定容至10mL。临用 现配。 5.7 试剂F:葡萄糖-6-磷酸脱氢酶溶液 称取葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(大于或等于95%纯度)适量,用试剂A溶解并稀释至125U/mL的酶 溶液。 5.8 试剂G:供试品酶溶液 称取己糖激酶固体或量取其液体适量,用冰预冷的水配制,并稀释成0.5U/mL~1.0U/mL己糖 激酶的溶液。 6 试验步骤 6.1 酶活性检测 6.1.1 底物工作溶液 按表1配制底物工作溶液,25℃水浴恒温,并用紫外-可见分光光度计监测在波长340nm处吸收 峰(A340)直至恒定。 表1 底物工作溶液配制表 单位为毫升 试剂 试验组 对照组 试剂A 1.00 1.00 试剂B 1.00 1.00 试剂C 0.10 0.10 试剂D 0.20 0.20 2GB/T47199—2026