ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T47216—2026 蚕白僵病诊断技术 Diagnostictechniquesforsilkwormwhitemuscardine 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 临床诊断 1 ………………………………………………………………………………………………… 6 样品的采集、运输与保存 2 ………………………………………………………………………………… 7 镜检法 2 …………………………………………………………………………………………………… 8 病原的分离与鉴定 3 ……………………………………………………………………………………… 9 PCR检测 4 ………………………………………………………………………………………………… 10 荧光定量PCR检测 6 …………………………………………………………………………………… 11 综合判定 7 ………………………………………………………………………………………………… 附录A(资料性) 蚕白僵病的临床症状 8 ………………………………………………………………… 附录B(资料性) 白僵菌光镜下的图像 9 ………………………………………………………………… 附录C(规范性) 病原的分离及培养所用试剂 10 ………………………………………………………… 附录D(规范性) PCR检测所用试剂 11 …………………………………………………………………… 附录E(资料性) 基因组DNA的提取方法 12 …………………………………………………………… 附录F(资料性) 蚕白僵病PCR检测的电泳图 13 ……………………………………………………… 附录G(资料性) 白僵菌PCR产物参考序列 14 ………………………………………………………… 附录H(资料性) 蚕白僵病荧光定量PCR检测扩增曲线图 15 ………………………………………… ⅠGB/T47216—2026 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:西南大学、中国农业科学院蚕业研究所、四川省蚕业管理总站。 本文件主要起草人:于滨、陈涛、马露芸、孟宪志、李春峰、潘国庆、陈爽、何章帅、范镯曦。 ⅢGB/T47216—2026 引 言 蚕白僵病(Silkwormwhitemuscardine)是由白僵菌属的白僵菌侵入蚕体而引起的一种严重危害养 蚕业的疫病。蚕病死后被覆粉状白色或类白色的分生孢子,故称白僵病。我国将其列为三类动物疫病。 白僵菌属于子囊菌门(Ascomycota)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、虫草 菌科(Cordycipitaceae)、白僵菌属(Beauveria)。其中球孢白僵菌(Beauveriabassiana)对蚕的致病性最 强,是最常见的致病菌种,导致白僵病的典型症状。卵孢白僵菌(Beauveriatenella;常称为布氏白僵 菌,Beauveriabrongniartii)对家蚕的致病性较弱,但在某些条件下仍能引发感染,存在局部暴发的风 险。白僵菌属的其他菌种自然感染的案例极少。 ⅣGB/T47216—2026 蚕白僵病诊断技术 1 范围 本文件描述了蚕白僵病的临床诊断、镜检法、病原分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、荧光定量 PCR等诊断方法。 本文件适用于蚕白僵病的诊断、检测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BHQ:黑洞淬灭剂(Blackholequencher) bp:碱基对(Basepairs) CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(Hexadecyltrimethylammoniumbromide) Ct:循环阈值(Cyclethreshold) dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(Deoxyribonucleosidetriphosphate) EDTA:乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraaceticacid) FAM:6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein) HCl:盐酸(Hydrochloride) PCR:聚合酶链式反应(Polymerasechainreaction) PDA:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potatodextroseagarmedium) Tris:三羟甲基氨基甲烷(Tris-hydroxymethylaminomethane) 5 临床诊断 5.1 流行病学 5.1.1 蚕白僵病多发生于雨季、多湿的蚕区。该病在蚕各龄期均能感染,小蚕期(1龄~3龄)多呈散发 状态,大蚕期(4龄~5龄)发病较为普遍,一般从感染到发病死亡时间,小蚕为2d~4d,大蚕为4d~ 6d。 1GB/T47216—2026 5.1.2 传染源主要是病蚕、携带白僵菌的野外昆虫以及病原污染的桑叶和蚕具。 5.1.3 传染途径主要是通过表皮接触传染,其次为创伤感染。 5.1.4 传染方式主要是白僵菌的分生孢子附着于蚕体表皮上,在24℃~28℃、相对湿度90%以上的 条件下侵入蚕体所致。 5.2 临床症状 5.2.1 幼虫期病征:病蚕食桑减少,运动不活泼,蚕体上有时会出现黑褐色油渍状病斑,有的体色略带 淡红色或桃红色。初死蚕体柔软且有弹性,逐渐变硬。死后1d~2d,先在气门及节间膜处生出白色菌 丝,逐渐布满全身。体表被覆白粉状的分生孢子是蚕白僵病最典型的特征(见附录A)。 5.2.2 蛹期病征:蛹期发病死后不久,蛹胸部逐渐收缩凹陷,腹部干瘪变硬。先在气门及节间膜处生出 白色菌丝,逐渐布满全身(见附录A)。 5.2.3 蛾期病征:极少部分病蛹能化蛾,但不能产卵,蛾死后尸体干瘪,足与翅膀易脱落。 5.3 结果判定 结合5.1的流行病学特点,若蚕体出现5.2的典型症状,可判为蚕白僵病疑似病例。 6 样品的采集、运输与保存 6.1 仪器设备 6.1.1 样品袋或离心管。 6.1.2 镊子。 6.1.3 密封袋。 6.1.4 冰箱(4℃、-20℃、-80℃)。 6.2 样品的采集 将待检的蚕体样品用镊子夹取置于无菌的样品袋或离心管内,编号并填写相应采样单。采样时尽 量避免杂菌污染。 6.3 样品的运输 样品采集后用密封袋做二次包装。然后将样品置保温箱中,加入预冷的冰袋,密封运输。 6.4 样品的保存 待检样品送达实验室后,将每组样品随机分成2份,一份用于立即检测,另一份保存于-20℃冰箱 中作为留样,长期保存应置于-80℃冰箱。 7 镜检法 7.1 仪器设备 7.1.1 A2型二级生物安全柜。 7.1.2 解剖工具(解剖剪、解剖刀、镊子)。 7.1.3 微量可调移液器(1000μL、100μL、10μL)及配套吸头。 7.1.4 载玻片及盖玻片。 2GB/T47216—2026