CS TB 团 体 标 准 T/ NAIA 0188-2023 枸杞叶及枸杞 茶中总黄酮含量的测定 Determination of total content of flavonoids in the wolfberry leaves and wolfberry tea 2023-03-01发布 2023-03-10实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 ICS 65.020.01 CCS B 38 全国团体标准信息平台 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 -2020 给出的规则起草。 本文件由宁夏 回族自治区 药品检验研究院 （国家枸杞产品质量检验检测中心（宁夏）） 提出。 本文件由宁夏化学分析测试协会归口。 本文件起草单位：宁夏 回族自治区 药品检验研究院 （国家枸杞产品质量检验检测中心（宁夏））、 宁夏医科大学 、宁夏农林科学院农业生物技术研究中心、中国科学院兰州化学物理研究所 、宁夏食品 检测研究院 、宁夏回族自治区残疾人康复中心。 本文件主要起草人：马玲、 雷艳、王忠强、刘淑瑛、 郑国保、 王宁丽、马小荣、刘东鹏、赵茜、 吴少涛、 马宗卫、王英华 。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 1 枸杞叶及枸杞茶 中总黄酮含量的测定 1 范围 本文件规定了 枸杞叶及 枸杞茶中 总黄酮含量的分光光度 计测定方法 。 本文件适用于 枸杞叶及 枸杞茶中 总黄酮含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义 适用于本文件。 3.1 枸杞茶 Wolfberry tea 枸杞芽茶和枸杞叶茶的全称。 4 原理 枸杞茶或枸杞叶 中的总黄酮（以芦丁计）经乙醇溶液提取后。在弱碱性条件下与铝盐生成螯合 物，加入氢氧化钠溶液后显色， 在波长 510 nm处测定吸光度值 。在一定浓度范围内，该螯合物的吸 光度值与总黄酮含量呈成正比， 采用标准曲线法定量 。 5 试剂与材料 除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯和 GB/T 6682 中规定的 三级水。 5.1试剂 5.1.1 无水乙醇（ CH 3CH 2OH）：分析纯 5.1.2 亚硝酸钠（ NaNO 2）：分析 纯 5.1.3 硝酸铝（ Al（NO 3）3）：分析 纯 5.1.4 氢氧化钠（ NaOH）：分析 纯 5.2 溶液的配制 5.2.1 乙醇溶液（ 7+3）：量取 70 mL无水乙醇加入到 30 mL纯化水中，混匀备用。 5.2.2 亚硝酸钠溶液（ 50 g/L）：准确称取 5.00 g亚硝酸钠于 100 mL容量瓶中，加适量水溶解，加水 定容至刻度，摇匀， 备用。 5.2.3 硝酸铝溶液（ 100 g/L）：准确称取 10.00 g硝酸铝于 100 mL容量瓶中，加适量水溶解，加水定 容至刻度，摇匀， 备用。 全国团体标准信息平台 2 5.2.4 氢氧化钠溶液（ 40 g/L）：准确称取 8.00 g氢氧化钠于 200 mL容量瓶中，加适量水溶解，用水 定容至刻度，摇匀， 备用。 5.3 标准品 芦丁标准品 （C27H30O16，CAS号：153-18-4）：纯度 ≥98.0%，或经国家认证并授予标准物质证 书的标准物质。 5.4 标准溶液配制 准确称芦丁标准品 13.40 m g（精确至 0.0001g）至50 mL容量瓶中，加乙醇溶液 （5.2.1）适量并 超 声使溶解 ，定容至刻度，摇匀，配制成 0.268 mg/mL的芦丁标准 溶液。 5. 5 材料 微孔滤膜： 0.45 μm，有机系。 6 仪器与设备 6.1 紫外分光光度计。 6.2 分析天平，感量 0.000 01 g。 6.3 粉碎机。 6.4 超声波清洗器。 6.5 水浴锅。 6.6 干燥箱。 7 试样制备 7.1 试样前处理 7.1.1 枸杞茶 取枸杞茶约 20g，粉碎， 样品全部通过 50目筛，置干燥器中保存，待用。 7.1.2 枸杞鲜叶 将枸杞鲜叶置 干燥箱中烘干（热风烘干温度控制在 45-60℃），记录水分含量。 取烘 干后的样品约20g，粉碎， 样品全部通过 50目筛，置干燥器中保存，待用。 7.1.3 枸杞干叶 取枸杞叶约 20g，粉碎， 样品全部通过 50目筛，置干燥器中保存，待用。 7.2 试样提取 取样品细粉 约1 g（精确至 0.0001 g），置三角瓶中，加 50 mL的乙醇溶液（ 5.2.1）冷浸 30 min， 沸水浴 98-100℃回流提取 1 h，滤过，分取滤液， 滤渣再加 30 mL的乙醇溶液（ 5.2.1），水浴回流提 取1 h，过滤，合并滤液，用乙醇 溶液 （ 5.2.1）洗涤滤渣并定容至 100 m L的量瓶中．摇匀， 滤过（5.5） 作为试液，待用。 8 分析步骤 8.1 标准曲线的绘制 全国团体标准信息平台 3 精密量取芦丁标准 溶液（ 5.4）0 mL、0.1 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL分别 置10 mL容量瓶中，分别加水 至2.0 mL，各加亚硝酸钠 溶液（5.2.2）0.4 mL，摇匀，放置 6 min， 加硝酸铝 溶液（5.2.3）0.4 mL，摇匀，放置 6 min，加氢氧化钠 溶液（5.2.4）4.0 mL，加水至刻度 ， 摇匀，放置 15 min，即得到芦丁含量分别为 0.00 mg/L 、2.68 mg/L、10.72 mg/L、21.44 mg/L、32.16 mg/L、 42.88 mg/L、53.60 mg/L的标准系列浓度。 以相应试剂作空白，在 510 nm波长处测定吸 光度值，以 芦丁质量浓度 ρ(mg/L)为横坐标， 相应的吸光度值A为纵坐标， 绘制标准曲线， 得到标准曲线回归 方程。 8.2 测定步骤 精密量取 待测液 1.0 mL，置 10 mL容量瓶中 ，加水至 2.0 mL，加亚硝酸钠 溶液（5.2.2）0.4 mL， 摇匀，放置 6 min，加硝酸铝 溶液（5.2.3）0.4 mL，摇匀，放置 6 min，加氢氧化钠 溶液（5.2.4）4 mL， 加水至刻度 ，摇匀，放置 15 min，试样于 510 nm波长处测定 ，以测得吸光值由标准曲线查得试样待 测液中总黄酮的含量，同时做空白实验 。 8.3 空白试验 分取 1.0 mL乙醇溶液（ 5.2.1）于 10.0 mL量瓶中，加水 至2.0 mL，其他操作步骤同 8.2。 9 结果计算和表达 试样中总黄酮含量以 芦丁的含量以百分含量计，按 公式（ 1）计算： （ ） 式（1）中： ω——试样中总黄酮含量的数值，单位为毫克每克（ mg/g） ρ——从标准曲线上查得试样待测液中总黄酮的质量浓度的数值，单位为毫克每升（ mg/L） ρ0——从标准曲线上查得空白待测液中总黄酮的质量浓度的数值，单位为毫克每升（ mg/L） V1——试样中加入并定容的提取溶液体积的数值，单位为毫升（ mL） V3——试样的最终定容体积的数值，单位为毫升（ mL） m——试样的质量的数值，单位为克（ g） V2——提取液的分取体积的数值，单位为毫升（ mL） 测定结果保留三位有效数字。 10 精密度 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 10%。 11 准确度 添加芦丁浓度为 0.15 mg/mL 时，样品的准确度为 101.9%，相对标准偏差为 1.8%。 全国团体标准信息平台