ICS 67.050 CCS X 24 团 体 标 准 T/ NAIA 0202—2023 枸杞中槲皮素和烟花苷的测定 高效液相色谱法 Determination of Quercetin and Nicotiflorin in Lycium barbarum L. by HPLC 2023-04-10发布 2023-04-17实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0202—2023 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监管重点实验室（枸杞和葡萄酒 质量安全） ）、宁夏工商职业技术学院、宁夏回族自治区食品质量监督检验二站、银川海关技术中 心、宁夏化学分析测试协会 本文件主要起草人 ：汤丽华、马雪梅、王琛、李婧、朱燕燕、邱治涛、王鹏、刘继辉、陈盼盼、 王泽岚、辛世华、赵瑞、张小飞。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0202—2023 枸杞中槲皮素和烟花苷的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了枸杞中槲皮素和烟花苷的液相色谱检测方法。 本文件适用于枸杞中槲皮素和烟花苷的定性和定量测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 NY/T 3950植物源性食品中 10种黄酮类化合物的测定 高效液相色谱 -串联质谱法 NY/T 3903 枸杞中黄酮类化合物的测定 T/NAIA 050枸杞及其制品中二氢槲皮素的测定 高效液相色谱法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 试样经甲醇溶液超声提取后 ，经反相色谱柱分离 ，以保留时间定性 ，用高效液相色谱仪测定和 确证，外标法定量。 5 试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1 甲醇：色谱纯。 5.1.2 磷酸 5.1.3 甲醇溶液（ 80:20，体积比）： 将80mL甲醇加入到 20mL水中，混合均匀。 5.2 标准品 5.2.1标准品：槲皮素（ Quercetin ，CAS号117-39-5，C15H10O7）、烟花苷（ Nicotiflorin ，CAS号 17650-84-9 ，C27H30O15），纯度均 ≥99%。 5.2.2混合标准储备液（ 1.0mg/mL ）：分别准确称取槲皮素、 烟花苷标准品 10mg（准确至 0.1mg），于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度， 4℃保存。 5.2.3混合标准中间液（ 100μg/mL ）：分别准确吸取槲皮素、 烟花苷标准储备液各 1.0mL于10mL 容量瓶中，用甲醇 :0.4%磷酸溶液 (50:50，体积比 )定容。 5.2.4混合标准使用液 ：分别吸取混合标准中间液 0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、5.0mL于10mL 容量瓶中，用甲醇 :0.4%磷酸溶液 (50:50，体积比 )定容至刻度， 配制成浓度分别为 5.0μg/mL 、 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0202—2023 10.0μg/mL 、20.0μg/mL 、40.0μg/mL 、50μg/mL的混合标准系列工作液，临用现配。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪 (HPLC)：带二极管阵列检测器或紫外检测器。 6.2 分析天平： 感量 0.1mg和0.01g。 6.3 超声波清洗器。 6.4 高速离心机，转速 ≥4000r/min 。 6.5 匀浆机。 6.6 高速粉碎机。 6.7 微孔滤膜： 孔径 0.45μm。 7 分析步骤 7.1试样制备 枸杞鲜果 、枸杞干果等取代表性样品经匀浆机或高速粉碎机匀浆粉碎后均匀分装 ，密闭常温或 冷藏保存。 7.2试样溶液的提取 称取试样 5.0g（精确到 0.01g）置于 25mL容量瓶中，加入甲醇溶液 (5.1.3)20mL ，超声提取 10min，取出，放冷，用甲醇溶液 (5.1.3)定容至刻度，混匀， 转移至 50mL离心管中， 8000r/min 离 心5min，上清液经 0.45μ m微孔滤膜过滤后，上机待测。 7.3仪器参考条件 7.3.1 色谱柱： C18色谱柱， 4.6*250mm ，5μm，或性能相当。 7.3.2 流动相：甲醇： 0.4%磷酸溶液 =(50:50，体积比 )。 7.3.3 流速： 1.0mL/min 。 7.3.4 检测波长： 360nm。 7.3.5 进样量： 10μL。 7.3.6 柱温： 25℃。 7.4校准曲线的制作 将校准曲线工作液按浓度由低到高的顺序各取 10L分别注入液相色谱仪，测定相应的峰面积， 以校准曲线工作液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线。 7.5试样溶液的测定 将试样溶液注入液相色谱仪中 ，以保留时间定性 ，得到峰面积 ，根据校准曲线得到待测液中槲 皮素和烟花苷的质量浓度。在上述条件下，槲皮素和烟花苷 的色谱图参见附录 A。 8 分析结果的表述 试样中槲皮素和烟花苷含量按式（ 1）进行计算： 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0202—2023 式中： X ──样本中槲皮素和烟花苷含量，单位为毫克每千克（ mg/kg）； C ──试样溶液浓度，单位为微克每毫升（ μg/mL）； V ──试样提取体积，单位为毫升（ mL）； m ──试样质量，单位为克（ g）。 注：测定结果用平行测定的算数平均值表示，保留三位有效数字。 9 精密度 在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。 10 定量限 当称样量为 5g，定容体积为 25mL，方法的定量限为 0.02 g/kg。 ）（ 110001000 V C    mX 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0202—2023 附录 A (资料性附录 ) 烟花苷、槲皮素的色谱图 图A.1 烟花苷、槲皮素的色谱图 全国团体标准信息平台