ICS11.100 CCSC04 团体标准 T/CRHA018—2023 ———————————————————————————————— ———————— 人肝胆肿瘤细胞类器官构建、质量控制与 保藏操作指南 Guidelinesfortheestablishment,qualitycontrolandstorage ofHumanhepatobiliarytumororganoids 中国研究型医院学会发布 2023-07-14发布 2023-08-01实施 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CRHA018—2023 I目次 前言...................................................................................................................................................II 引言.................................................................................................................................................III 1范围...............................................................................................................................................1 2规范性引用文件...........................................................................................................................1 3术语和定义...................................................................................................................................1 4缩略语...........................................................................................................................................3 5基本原则.......................................................................................................................................4 6操作流程与方法...........................................................................................................................5 7检测指标与检测方法...................................................................................................................8 附录A（资料性）肝胆肿瘤类器官培养用试剂材料与操作技术要点.......................................10 附录B（资料性）短串联重复序列（STR）检测.........................................................................13 附录C（资料性）染色体核型检测...............................................................................................14 附录D（资料性）肝胆肿瘤类器官鉴定.......................................................................................15 附录E（资料性）标志基因检测实时荧光定量PCR法.............................................................17 参考文献...........................................................................................................................................19 全国团体标准信息平台 T/CRHA018—2023 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第一部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规 则起草。 本文件由中国研究型医院学会肝胆胰外科专业委员会提出。 本文件由中国研究型医院学会归口。 本文件起草单位：清华大学附属北京清华长庚医院、中国食品药品检定研究院、中国计量科学研究 院、中国医学科学院药物研究所、中国科学院上海药物研究所、上海美迪西生物医药股份有限公司。 本文件主要起草人：王韫芳、李迪、陈昱安、刁金美、耿兴超、王晶、傅博强、强桂芬、潘国宇、 彭双清、李桦。 全国团体标准信息平台 T/CRHA018—2023 III引言 类器官（organoids）是具有器官关键性特征的三维（3D）细胞培养物，它包括一个自 我更新干细胞群，可分化为多个器官特异性的细胞类型，与相对应的器官拥有类似的空间组 织并能够重现对应器官的部分功能，从而提供一个高度生理相关系统。类器官与传统模型相 比，具备细胞增殖分化、自我更新、自组装、可长期培养、遗传稳定性等特点，因此可以模 拟体内器官发育和病理过程，是一种可用来开发模拟人类疾病的更好模型，和高效、低成本、 精准的药筛平台。 作为近10年来生物学界和临床医学最热门的前沿技术之一，类器官技术取得突飞猛进 的发展，人体各个器官均有其类器官建立的报道，同样肝脏肿瘤类器官的建立及应用也是研 究的热点。肝胆肿瘤类器官培养起始细胞来自于肝癌，胆管癌，胆囊癌，胰腺癌患者的肿瘤 细胞，包括手术中切取的原代肿瘤组织、原代穿刺组织原代肝脏组织等，由于人肝胆肿瘤组 织的来源可能涉及的风险和伦理敏感性，运送的冷链保持，类器官建立所涉及的原代细胞分 离、培养、扩增、冻存、复苏、质量控制、功能分析检测等具体试验操作的标准规范，以及 整个过程中的污染控制，都体现了肝脏类器官建立及检测方案的多样性、复杂性和特殊性。 鉴于此，制定人肝胆肿瘤细胞类器官的构建、保藏及检测应遵循的技术通用要求，有助 于规范人肝脏肿瘤细胞类器官的研究、开发与评价，从而推动肝脏肿瘤细胞类器官在基础医 学和临床研究(包括肝脏生理稳态的研究、疾病模型的建立、药物的筛选、基因治疗和器官 芯片的研发等)应用中的发展。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CRHA018—2023 1人肝胆肿瘤类器官构建、质量控制与保藏操作指南 1范围 本文件提供了肝胆肿瘤类器官构建、质量控制与保藏的的基本原则、操作流程方法以及检测指标与 检测方法的指导与建议。 本文件适用于肝胆肿瘤细胞类器官的培养、传代、冻存、复苏、质量控制与保藏过程。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T37864—2019生物样本库质量和能力通用要求（ISO20387:2018） GB/T38736—2020人类生物样本保藏伦理要求 GB/T42060—2022医学实验室样品采集、运送、接收和处理指南（ISO/TS20658:2017） WS233—2017病原微生物实验室生物安全通用准则 WS213—2018丙型肝炎诊断 WS/T299—2022乙型病毒性肝炎诊断标准 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 类器官organoids 类器官是干细胞、前体细胞和/或分化细胞通过细胞-细胞间以及细胞-基质间的互作而自发组织形成 的体外三维结构，能在多个方面再现体内相应组织或器官的结构与功能。 3.2 患者来源肝胆肿瘤类器官patientderivedhepatobiliarytumororganoid 由病理诊断为肝胆肿瘤患者自体肿瘤组织或细胞样本中提取的肿瘤细胞，通过3D培养形成的，可 以在体外扩增并重现原始肿瘤的病理形态和遗传特征的类器官。 3.3 肝胆肿瘤类器官培养基culturemediumforhumanhepatobiliarytumororganoids 全国团体标准信息平台 T/CRHA018—2023 2可以实现体外模拟肝胆肿瘤细胞生长及扩增所需微环境，能诱导肝胆肿瘤细胞长期体外扩增培养， 维持原始肿瘤细胞特性，实现体外肝胆肿瘤活组织类器官的长期存活的培养介质。 3.4 3D培养基质胶matrix