ICS T/WJQM A五家渠甜瓜协会团体标准 T/WJQMA02—2023 甜瓜抗白粉病鉴定规程 2023-9-19发布 2023-9-26实施 第六师农业科学研究所 发布 全国团体标准信息平台 前言 甜瓜属葫芦科黄瓜属作物，甘甜可口，风味芳香，是餐后的高档果品，故多年稳居国际市场十大畅 销果品之列。近年来，随着国内人们生活水平的迅速提高和甜瓜生产的发展，甜瓜既是馈赠亲友的高档 礼品，又是大众喜食的水果之一。白粉病是甜瓜生产中三大病害之一，其发病、传播速度极快，使得甜 瓜产量和品质严重下降。甜瓜白粉病是世界性病害，在中国无论南方、北方产瓜区都有发生，对我国甜 瓜生产构成严重威胁，造成巨大的损失；白粉病在国外，也是甜瓜首先要防治的病害。尽管白粉病可采 用化学防治，但由于危害甜瓜白粉病的生理小种较多，分化快，化学药剂很难十分有效地保证甜瓜的无 公害生产。现就甜瓜白粉病菌的抗性鉴定进行简要综述，旨在为甜瓜抗病品种的培育提供借鉴。 本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本部分由五家渠甜瓜协会提出。 本部分起草单位：新疆生产建设兵团第六师农业科学研究所。 本部分主要起草人：王志鹏、周晓健、段祥坤、訾慧芳、闫长伟、高帆、梅小鹏、王建玉、邓志斌、 张爱萍、刘星。 全国团体标准信息平台 甜瓜抗白粉病鉴定技术规程 1范围 本部分规定了甜瓜抗白粉病鉴定的术语和定义、接种体制备、鉴定条件及试验设计、接种、病情调 查、抗病性评价和鉴定记载表格。 本部分适用于各种甜瓜资源对甜瓜白粉病抗性的室内鉴定及评价。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本部分。 2.1生理小种 病原物种内在形态上无差异，但在不同种植物和品种上具有显著致病性差异的类群。 2.2鉴别寄主 用于鉴定和区分特定病原物的生理小种／致病型／株系的一套带有不同抗性基因的寄主品种／品 系或材料。 2.3甜瓜白粉病 由单囊壳白粉菌［Sphaerothecafuliginea(Schlecht)Poll.]和二孢白粉菌［Erysiphe cichoracearumDC.]所引起的叶部产生白色粉斑，严重时白粉可覆盖枝蔓、叶柄且叶部布满白粉症状的 甜瓜病害。其中S.fuliginea(schlecht.)poll.为主要的甜瓜白粉病病原物。 3接种体制备 3.1病原物采集 采集具有典型白粉病病斑的甜瓜病叶，用毛刷刷取叶片上的孢子于盛有无菌水的烧杯中，获得分离 物。分离物经形态学鉴定确认为Sphaerothecafuliginea(Schlecht)Poll.后，直接用于接种或扩繁备 用。 3.2生理小种鉴定 对将用于抗性鉴定接种的分离物首先进行生理小种鉴定。生理小种鉴别寄主采用国际通用的甜瓜不 同基因型材料进行鉴定，具体方法见附录A的A.2。 3.3接种体繁殖与保存 3.3.1接种体繁殖 在接种前需要进行病原物接种体的繁殖。常用的繁殖方法为：在温室内将白粉病菌的分生孢子接种 在感病品种上繁殖。接种前用干净毛刷刷取叶片上长出的新鲜孢子于盛有无菌水的烧杯中，再滴加1000 全国团体标准信息平台 μg/mL十二烷基硫酸钠（SDS),高速搅拌（1200r/min)3min～5min后即得孢子悬浮液，用血球计数板计 数分生孢子数稀释至接种浓度。为了不影响接种效果，白粉病菌孢子悬浮液放置时间最好不超过30min, 因此从菌液制备到接种完成应限制在2h内。 3.3.2病原物保存 活体植株保存法：选择易感白粉病的甜瓜或甜瓜品种，用喷雾接种法接种处于8～10叶期的感病品 种幼苗，接种后将其置于温度20℃～25℃、湿度（RH)50%的培养室内，注意隔离保存。离体子叶接种法： 用接种针挑取白粉病菌的分生孢子，置于附在甘露糖醇一蔗糖培养基的消毒子叶上（子叶消毒方法：用 0.05%的升汞溶液浸泡3min,然后用无菌水冲洗2～3次），置于17℃、有微弱光照的培养室内，用这种 方法可保存白粉菌30d～45d. 4室内抗性鉴定 4.1鉴定室设置 人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。 4.2坚定对照品种 鉴定时设“耀农25号”甜瓜为抗病对照品种，“新密25号”甜瓜为感病对照品种。 4.3鉴定设计 鉴定材料随机或顺序排列，每份材料重复3次，每重复10株苗。 4.4鉴定材料育苗 鉴定材料种子经5%次氯酸钠溶液浸种10min后，用清水冲洗，放入垫有两层滤纸的培养皿中，然后 于恒温培养箱中28℃催芽。待胚根长至0.5cm时，将其播于装有播种基质的塑料育苗钵内。育苗基质为 草炭、蛭石和菜田土（2:1:1),基质经高温蒸汽灭菌（134℃,30min).在20℃～25℃的日光温室内育苗， 幼苗应生长健壮、一致。 4.5接种 4.5.1接种期 甜瓜白粉病抗性鉴定接种期为1～2叶期。 4.5.2接种浓度 约5x10个孢子／mL. 4.5.3接种方法 接种采用喷雾接种法。用小型手持喷雾器将接种液均匀地喷于甜瓜叶片正，反两面至有水滴流出为 止。 4.6接种后管理 接种后将植株置于鉴定室内黑暗保湿（RH为70%～80%)12h～16h,以后每天光照14h,不再保湿。接种 期间温度控制在白天25℃～28℃,夜晚20℃～22℃范围内。 全国团体标准信息平台 5病情调查 5.1调查时间 病情调查于接种后10d～15d进行。 5.2调查方法 调查每份鉴定材料接种叶发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载病情级别，计算 出病情指数（DI). 图1病情指数计算公式 式中： DI--病情指数； s--各病情级别代表数值； n--各病情级别病株（叶）数； N--调查总株（叶）数 S--最高病情级别代表值。 5.3病情分级 室内病情分级及其对应的症状描述见表1。 表1甜瓜白粉病病情级别划分 病情指数 症状描述 0 无症状 1 病斑面积占叶面积的1/3以下，白粉状病斑模糊不清 2 病斑面积占叶面积的1/3～2/3，白粉状病斑较为明显，但分散不连片。 3 病斑面积占叶面积的2/3以上，白粉状病斑连片，叶片开始变黄 4 白粉层浓厚，由叶缘向里变褐 5 叶片变褐坏死斑面积占叶面积的2/3以上，叶缘上卷 6抗性评价 6.1鉴定有效性判别 当感病对照材料达到其相应感病程度（DI>55）,该批次抗白粉病鉴定视为有效。 全国团体标准信息平台 6.2抗性评价标准 依据鉴定材料的发病程度（病情指数）确定其对白粉病的抗性水平，划分标准见表2. 表2甜瓜对白粉病抗性评价标准 病情指数 抗性评价 0<DI≦15 高抗（HR） 15<DI≦35 抗病（R） 35<DI≦55 中抗（MR） 55<DI≦75 感病（S） DI>75 高感（HS） 7鉴定记载表格 甜瓜抗白粉病鉴定结果记载表格见表3 表3甜瓜抗白粉病鉴定结果记载表 编号品种名称来源 病情指数 病情指数抗性评价 0级1级2级3级4级5级 1.播种时间： 2.接种时间： 3.接种生育期： 4.生理小种类型： 5.调查日期： 鉴定技术负责人（签字）： 附录A (资料性附录) 甜瓜白粉病病原菌和生理小种 全国团体标准信息平台 A.1学名和形态描述 病原为瓜类单囊壳（Sphaerothecacucurbitae(Jacz.)Z.Y.Zhao）和葫芦科白粉菌（Erysiphe CucurbitacearumZheng&Chen），均属子囊菌亚门真菌。 2种病菌的无性态相似。分生孢子梗无色，圆柱形，不分枝，其上着生分生孢子。分生孢子无色、 单胞，椭圆形至长圆形，串生。有性阶段均产生闭囊壳，球形，褐色，无孔口，表面有菌丝状附属丝。 两者的主要区别是闭囊壳内子囊数和子囊内子囊孢子数目。瓜类单囊壳：闭囊壳生于白色至淡灰色的菌 丝表面，较常见，每一闭囊壳内只有1个子囊，阔卵圆形或近球形，无小柄，每个子囊内有8个单细胞、 无色、椭圆形的子囊孢子。葫芦科白粉菌：闭囊壳生于灰黄色至锈褐色的菌丝层内，较少见，直径80-140 微米；每一闭囊壳内有4-39个子囊，一般10-15个，子囊卵圆形或椭圆形，每个子囊内只有2个单细胞， 无色，椭圆形的子囊孢子。 A.2生理小种鉴定方法 A.2.1采用的鉴别寄主 为了鉴别不同的白粉病生理小种，目前已经确定了国际公认的13个白粉病病原菌生理小种鉴别寄 主，包括Ira2nH、Vedrantais、Topmark、PMR5、PMR6、PMR45、WMR29、PI124111、PI124112、PI414723、 Edisto47、MR-1、NantaisOblong。通过这些鉴别寄主的抗感反应可以确定白粉病菌的生理小种(表2)。 A.2.2白粉病菌生理小种编码规则与命名 表A.1白粉病菌生理小种及其在鉴别寄主上的抗感反应 鉴别寄主生理小钟 S.fuliginea E.cichoracearum 012US2Fr345N1N2N3N40 1 IranH(伊朗)SSSSSSS----S S Topmark(美)SSSSSSS----S S PMR45(美)RRSSSSSRSRRR S PMR6(美)RRRRSRR----R R PI124111 -RRRR------- - PI124112RRRRRRR----R R PI414723 -RSR-RRSSSR- - PMR5(美)RRRRSRRRRRRR R Nantaisoblong(法)RS-S-SS----R R WMR29(美)RSHR-SSRRRRR R Edisto47(美)RRSRRRSRRSSR S MR-