I DB23 CS 65.020.20 ICS 65.020.20 CCS B 15 黑 龙 江 省 地 方 标 准 DB 23/T 2979—2021 大豆对大豆拟茎点种腐病抗病性 鉴定技术规程 2021-09-08 发布 黑龙江省市场监督管理局 2021-10-07 实施 发 布 DB23/T 2979—2021 前   本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 言 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由黑龙江省农业农村厅提出。 本文件由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：中国科学院东北地理与农业生态研究所。 本文件主要起草人：许艳丽、陆欣春、韩晓增、潘凤娟、邹文秀、李雪光、战丽莉、严君、陈旭。 I DB23/T 2979—2021 大豆对大豆拟茎点种腐病抗病性鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了大豆对由大豆拟茎点种腐病菌（Phomopsis longicolla Hobbs）引起的种腐病抗病性鉴 定术语和定义、病原菌接种体制备、大豆种子要求、大豆种子抗病性鉴定和大豆植株抗病性鉴定。 本文件适用于大豆对大豆拟茎点种腐病抗病性的鉴定和评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4404.2 粮食作物种子 第 2 部分：豆类 SN/T 4865 大豆拟茎点种腐病菌检疫鉴定方法 3 术语和定义 菌丝覆盖率 是指在大豆种子抗病性鉴定中，大豆拟茎点种腐病菌接种的种子中，菌丝全部覆盖的种子数占供试 种子总数的百分率。 4 病原菌接种体制备 4.1 培养基准备 病原菌菌株纯化及分离所用培养基为酸性 PDA 培养基(  APDA )，配方为马铃薯 200 g 、葡萄糖 20 g 、 琼脂条 20 g ，待 PDA 培养基冷却到 45 ℃ ～ 50 ℃ 时，用过滤除菌的 85%乳酸调节 pH 至 4.5 后到平板。 4.2 病原菌接种体制备 挑取少量活化的大豆拟茎点种腐病菌菌丝到 APDA 上，25 ℃ ～ 28 ℃ 12 h 光照 12 h 黑暗交替培养， 直到长出典型菌落，并符合 SN/T 4865 的规定。 5 大豆种子要求 所用品种种子的质量要求按 GB 4404.2 的规定执行。 6 大豆种子抗病性鉴定 1 DB23/T 2979—2021 6.1 鉴定方法和公式 将病原菌接种于 APDA培养基平板上，25 ℃ 暗培养 5 d 后，选取健康大豆种子，经 75 % 酒精消毒  3 min，用无菌水冲洗 3 遍，放置于灭菌的滤纸上稍风干，匀距摆放在菌落边缘，以 APDA 培养基上不接 种病原菌的大豆种子为对照，继续 25 ℃ 暗培养5d。每皿 10 粒，重复3次。接种后第 4 d 和第 5 d 分别 调查发芽种子数，第 5 d 调查被菌丝覆盖的大豆种子数，计算种子发芽势、发芽率和菌丝覆盖率。 计算公式： 种子菌丝覆盖率( % ) = (被菌丝覆盖种子数/鉴定种子总数) × 100 发芽势( % )=［发芽初期(第 4 d )正常发芽种子数/鉴定种子总数］ × 100 种子发芽率（ % ）=[发芽终期（第 5 d ）全部正常发芽总数／鉴定试种子总数] × 100 6.2 抗病评价标准 抗病标准以种子菌丝覆盖率、种子发芽势和发芽率降低率综合评定，即如果种子菌丝覆盖率高于 80.0 % 时，以种子菌丝覆盖率为主要评价指标，如种子菌丝覆盖率低于 80.0 % 时，以种子发芽势和 发芽率降低为主要指标。 标准如下：种子菌丝覆盖率，种子发芽势和发芽率降低 低于 40.0 % ： 抗病品种； 40.0 % ~ 59.9 %： 中抗品种； 60.0 % ~ 79.9 %： 中感品种； 80.0 % ~ 99.90 %： 感病品种； 100.0 %： 高感品种。 记录见附录表 A。 7 大豆植株抗病性鉴定 7.1 植株准备 采用苗期切顶端接种法。在温室花盆中播种大豆，待大豆植株的第一片三出复叶展平时，在茎节点 下面的横切面上将茎秆剪断，下部植株用于接种。 7.2 鉴定方法 将病原菌在 APDA 培养基平板上 25 ℃ 暗培养 10 d ，在菌落边缘用打孔器打取直径为 5 mm  的菌丝块贴于刚剪断的植株茎秆横切面上，用封口膜包住接种体和植株茎秆横切面，套塑料袋保湿 48  h ，接种 30 株；以直径 5 mm 的 APDA 培养基块贴于大豆植株茎秆横切面作对照。 7.3 抗病性评价标准 接种后 2 d 取下接种体，接种 后 7 d 测量大豆植株茎病斑长度，并计算茎病斑长度占植株茎长度的 百分率。 茎病斑长比率（ % ）=（ 茎病斑长度 ／ 植株茎长度 ）×100 茎病斑长度占植株茎长度的百分率： 低于 4.0 % ： 抗病品种； 4.0 % ~ 5.9 %： 中抗品种； 2 DB23/T 2979—2021 6.0 % ~ 7.9 %： 中感品种； 8.0 % ~ 9.9 %： 感病品种； 10.0 %以上： 高感品种。 记录见附录表 B。 7.4 调查记录 详细记载调查方法和鉴定过程，并记录存档。 3 DB23/T 2979—2021 附 录 A （资料性） 大豆拟茎点种腐病种子抗病性鉴定记载、评价表 表 A.1 大豆拟茎点种腐病种子抗病性鉴定种子菌丝覆盖率调查表 接种日期： 调查人： 鉴定地点： 记录人： 鉴定编号 调查日期： 单位： 重复 鉴定种子数 被菌丝覆盖种子数 种子菌丝覆盖率 （ % ） I II III I II III I II III … 表 A.2 大豆拟茎点种腐病种子抗病性鉴定种子发芽势和种子发芽率调查表 接种日期： 调查人： 鉴定 编号 重复 鉴定地点： 记录人： 鉴定 种子数 调查日期： 单位： 种子发芽数 接种第 4 d 种子发芽势 （ % ） 种子发芽率（ % ） 接种第 5 d I II III I II III I II III … 4 DB23/T 2979—2021 接种日期： 调查人： 表 A.3 大豆拟茎点种腐病种子抗病性鉴定评价表 鉴定地点： 调查日期： 记录人： 单位： … 鉴定编号 鉴定品种 种子菌 I 丝 覆 盖 II 率（ % ） III 平均 降低 种子发 芽 势 （ % ） I II III 平均 降低 种子发 芽 率 （ % ） I II III 平均 降低 抗病性级别 抗病性评价 5 DB23/T 2979—2021 附 录 B （资料性） 大豆拟茎点种腐病植株抗病性鉴定记载、评价表 表 B.1 大豆拟茎点种腐病植株抗病性鉴定茎病斑长度调查表 播种日期： 调查人： 接种日期： 记录人： 调查日期： 鉴定地点： 重复 茎病斑长度 （mm） 植株茎长度 （mm） 鉴定 编号 茎病斑长占植株茎长 百分比（%） I II III I II III I II III … 表 B.2 鉴定编号 鉴定品种 大豆拟茎点种腐病植株抗病性鉴定评价表 茎病斑长占植株茎长比率（%） I II III 抗病性 级别 抗病性 评价 平均 … ________________________ 6