SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4849.5—2017 出口食品及饮料中常见小浆果成分的 检测方法实时荧光PCR法 第5部分：蔓越莓和蓝莓 Identification of the ingredients of common small berry fruits in food and juice for export-Real-time PCR method- 行业标准信息服务平台 Part5:Cranberry/blueberry 2017-07-21发布 2018-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4849.5—2017 前言 SN/T4849《出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法 实时荧光PCR法》系列标准共分为 6部分： 第1部分：蓝莓； 第2部分：树莓； 一第3部分：黑加仑； 一第4部分：桑甚； 一第5部分：蔓越莓和蓝莓； 第6部分：猕猴桃 本部分为SN/T4849的第5部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、 本部分主要起草人：吴亚君、陈颖、杨艳歌、黄文胜、韩建勋、张九凯、邓婷婷、王斌、刘鸣畅 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4849.5—2017 出口食品及饮料中常见小浆果成分的 检测方法实时荧光PCR法 第5部分：蔓越莓和蓝莓 1范围 SN/T4849的本部分规定了出口食品及饮料中蔓越莓和蓝莓成分的检测方法实时荧光PCR法。 本部分适用于鲜果、冷冻果、蜜饯、鲜榨果汁、果肉型果汁、混浊汁、果干、果酱、及其他以蔓越莓和蓝 莓为原辅料的食品及饮料中蔓越莓和蓝莓成分的定性检测（清汁及果酒除外）。本部分所规定方法的最 低检出限（LOD)为1%（体积比）。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27403一2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测 GB/T27658—2011蓝莓 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 小浆果smallberryfruits 浆果是指由一个子房或联合其他花器发育成的柔软多汁的肉质单果，由一个或几个心皮形成。小 浆果则泛指果实较小、多汁的一类浆果。 3.1.2 蔓越莓cranberry 杜鹃花科越橘属红莓苔子亚属，一种表皮及果肉都是鲜红色的圆形小浆果的俗称，别名：蔓越橘、小 红莓，酸果蔓、蔓越梅、鹤莓。拉丁学名：Oaycoccos。分为大果红莓苔子（美洲蔓越橘）（Vacciniummac rocarpon），小果红莓苔子（毛蒿豆）（Vacciniummicrocarpum），红莓苔子（北方蔓越橘）（Vaccinium ozycoccus），红果扁枝越橘（南方蔓越橘）（Vacciniumerythrocarpum）4个品种群。 3.1.3 蓝莓blueberry 根据GB/T27658一2011描述，蓝莓是杜鹃花科越橘属植物中蓝果类型的果实，小浆果，近圆形或圆扁 形，并披一层白色果粉，果肉细腻，种子极小。拉丁学名：Vacciniumspp.，分为兔眼蓝莓（Vacciniumvirga tum）、高丛蓝莓（VacciniumcorymbosumL.）（分：南高丛蓝莓、北高丛蓝莓）、半高丛蓝莓（Vacciniumangust 1 SN/T4849.5—2017 ifoliumXVacciniumcorymbosum）、矮丛蓝莓（Vacciniumangustifolium）五个品种群。 3.2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleicacid）。 PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）。 Ct值：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。 dNTP：脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonuleosidetriphosphate）。 dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosinetriphosphate）。 dCTP：脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidinetriphosphate）。 dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosinetriphosphate）。 dTTP：脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidinetriphosphate）。 UNG：尿嘧啶N-糖基化酶（uracilN-glycosylase）。 CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammoniumbromide）。 Tris：三羟甲基氨基甲烷[Tris(Hydroxymethyl)aminomethane]。 EDTA：乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic acid)。 Tag：水生栖热菌（Thermusaquaticus）。 OD：光度密度（opticaldensity）。 4方法提要 果实样品直接粉碎离心，果汁样品直接离心，提取沉淀DNA，果干、果酱、蜜饯先用蒸馏水清洗再提 取DNA。以蔓越莓或蓝莓果实为阳性对照，以其他水果DNA为阴性对照，无菌水作为空白对照。使 用特异性引物进行实时荧光PCR扩增，通过实时荧光信号曲线判定是否存在蔓越莓或蓝莓成分。 5试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均 用无DNA酶污染的容器分装。 5.1检测用引物和探针：蔓越莓和蓝莓成分扩增引物和探针、内参照（显花植物NADH基因）引物和探 针详见表1。蔓越莓和蓝莓扩增靶标序列参见附录A。 表1蔓越莓和蓝莓序列引物探针 扩增片 物种名称 引物/探针序列（5'-→3） 靶基因 段长度 F:GCTGAAGCAGCTACTTTCGAAGTAACA NADH dehydrogenase 内参照 R:AGGAGCCGTGTGAGATGAAAGTCTCA 138 bp subunit B(ndhB)gene P:FAM-TGGAGTGGGAGAGTCAGAGTCGAAAAGAGG-BHQ1 F:CATTTTAGCTTCAAATGGTTCGTCT 蔓越莓和 maturase K(matK) R:TGAGTCCGTACCATTGAAGGTTTTA 192bp 蓝莓 gene P:FAM-ACGCTTGAAAGATAGCCCAGAAAGTCGAA-TAMAR 2