ICS 65.120 SN B 46 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5123—2019 进出口饲料组胺测定 比色法和酶联免疫吸附法 Determination of histamine content in feeds for import and export- Colorimetric assay and enzyme immunoassay method 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5123—2019 前言 本标准依据GB/T1.1一2009给出的规则编写。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福州海关、中华人民共和国东山海关、中华人民共和国天津海关 本标准主要起草人：王武军、陈艳、陈俊玉、郑腾、白泉阳、张体银、李富文、张志灯、于师宇、张玉燕、 钱疆、林素洁、余晓薇。 业标准信息服务平台 SN/T5123—2019 进出口饲料组胺测定 比色法和酶联免疫吸附法 1范围 本标准规定了进出口饲料（鱼、鱼粉）中组胺的微孔板比色法和酶联免疫吸附法。 本标准适用于进出口饲料（鱼、鱼粉）中组胺含量的筛选检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB/T20195动物饲料试样的制备 3微孔板比色法 3.1方法概述 版文本为 样品提取后，通过离子交换柱纯化分离组胺和杂质。分离纯化后的组胺经过衍生反应，加人显色 剂，然后在波长450nm处测量吸光度值。显色剂的吸光度值和样品中组胺的浓度成正比。借助标准 曲线可以获得被检测样品中组胺的含量 标准信息服务平台 3.2 设备、材料和试剂 3.2.1 天平：读数精度0.01g。 3.2.2 移液器。 3.2.3 酶标仪。 3.2.4 恒温培养箱。 3.2.5 离心管：50mL、10mL。 3.2.6 粉碎机。 3.2.7 离心机。 3.2.8 涡旋混合器。 3.2.9 振荡摇床。 3.2.10 水：符合GB/T6682中二级水的规格要求。 3.2.11 异丙醇和70%异丙醇溶液，分析纯。 3.2.12 标准物质：盐酸组胺（C,H.N3·2HCl.分子量为184.07，纯度≥99%）。 3.2.13 组胺标准溶液1.0mg/mL，称取盐酸组胺标准物质16.57mg于10mL容量瓶中，用水溶解并 定容至刻度，得到组胺标准储备溶液1.0mg/mL，于4℃保存，可使用3个月。 1 SN/T5123—2019 3.2.14商品化试剂（RIDAQUICKHistamin）：包含离子交换柱、组胺标准品0mg/kg、2.5mg/kg、 5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、96孔微孔板、洗脱缓冲液、洗涤缓冲液、显色剂1和2。 3.3样品制备 3.3.1饵料鱼样品 用50mL蒸馏水对50.0g饵料鱼样品进行均质处理。如涉及饵料鱼冻片样品，待恢复室温后采样 温2000r/min离心3min，取1mL上层清液进一步纯化。 使用3mL稀释后的洗涤缓冲液洗涤离子交换柱，加人1mL上清液于离子交换柱，令其缓慢流过 离子交换柱，用1mL70%的异丙醇洗涤离子交换柱，分别使用3mL稀释后的洗涤缓冲液洗涤离子交 换柱两次，排除掉洗涤液，用新的试管收集组胺洗脱液；小心滴加0.5mL洗脱缓冲液，使其缓慢流入离 子交换柱中，再加入0.5mL洗脱缓冲液；压入少量空气，得到全部洗脱液；用漩涡混合器混合洗脱液， 取混合后的洗脱液200μL用于显色反应。 3.3.2饲料（鱼粉）样品 称取2g研磨后的样品于合适容器中，加人20mL70%异丙醇溶液，充分振荡4min（人工或使用 搅拌器），用滤纸过滤提取物，滤液离心或静置数分钟；取200uL滤液或上清液进行纯化。 使用3mL稀释后的洗涤缓冲液洗涤离子交换柱，加人200uL上清液于离子交换柱，分别使用 3mL稀释后的洗涤缓冲液洗涤离子交换柱两次，排除掉洗涤液，用新的试管收集组胺洗脱液。小心滴 加0.5mL洗脱缓冲液，使其缓慢流人离子交换柱中，再加人0.5mL洗脱缓冲液。压入少量空气，得到 全部洗脱液，用漩涡混合器混合洗脱液，取混合后的洗脱液200uL用于显色反应。 3.4试验步骤 3.4.1按比例1：2（1+1）混合显色剂1和2。 3.4.2将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插人微孔板架，记录下标准品和样品的位置。 3.4.3对于标准品孔，每孔加入50μL标准品和150uL洗脱液。移取每份标准品时要更换枪头。 3.4.4对于样品孔，每孔加人样品洗脱液200uL。V 3.4.5 每孔中（样品和标准品）加人50uL工作浓度的显色剂混合物 3.4.6 在450nm处测量吸光度值，以空气为空白对照。10min内读取结果 3.5结果计算 3.5.1计算相对吸光度值 分别计算标准和样品的平均吸光值。按下列公式（1）计算标准液和样液的相对吸光度值。 B .(1) 式中： A—相对吸光度值 B——标准液和样液的平均吸光度值 B。——0mg/kg标准液的平均吸光度值 1）注：给出该信息是为了方便本标准使用者，并不表示对某一产品操作步骤的认可。如果其他产品的操作步骤 有不同，须经实验评估后采用。 2