ICS 62.020.01 SN B 16 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5130—2019 Identification of Oryza granulata Nees et Arn. ex Hook. f. 业标准信息服务平台 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总馨 发布 SN/T5130—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准主要起草人：宋云、徐晗、宗凯、许瑾、孙涛、陈乃中。 业标准信息服务平台 SN/T5130—2019 疣粒稻鉴定方法 1范围 本标准规定了疣粒稻种质资源的检验鉴定方法。 本标准适用于疣粒稻和其遗传材料的检测鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14072林木种质资源保存原则与方法 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 小穗 spikelet 小穗是一个穗状花序，含1至多数小花，花生于颖状苞片内，成熟后又称谷粒。小花花被退化为鳞 片状、刚毛状、鳞被状。小穗再排成穗状、指状、总状或圆锥状花序。 3.1.2 husk 又称谷壳，麸糠。小穗的一部分，由排列整齐、具有乳头状突起的表皮细胞，又分为：内，外。 3.1.3 叶舌ligule 叶片与叶鞘交界处内侧的膜状突起。禾本科植物水稻等具有叶舌。它可使叶片向外倾斜伸出，有 利于接受阳光，同时由于它的生长部位，能防止昆虫、病菌、雨水等进人叶鞘筒内。叶舌是叶鞘的延长， 其大小、形状和毛茸的有无，可作分类依据之一。禾本科的叶舌，常见的有撕裂状叶舌、二深裂叶舌、短 叶舌、具睫毛叶舌和长叶舌等。 3.1.4 磷酸丙糖异构酶Triosephosphateisomerase,TPI 磷酸丙糖异构酶是糖酵解过程中催化二羟丙酮磷酸与3-磷酸甘油醛之间可逆反应的一种异构酶， 其催化功能高度保守，其基因分子结构在生物的长期进化中未发生大的改变，在水稻中是单拷贝、直系 同源基因，可作为生物遗传分化和分子进化研究中的重要指标 3.2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 1 SN/T 5130—2019 CTAB：cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵 PCR：polymerasechainreaction，聚合酶链式反应。 DNA：deoxyribonuleicacid,脱氧核糖核酸 dNTP：deoxyribonucleosidetriphosphate，脱氧核苷酸三磷酸 Taq酶：栖热水生菌DNA聚合酶。 4 疣粒稻基本信息 学名:Oryza granulata Nees et Arn.ex Hook.f. 分类地位：植物界（Plantae），被子植物门（Angiospermae），单子叶植物纲（Monocotyledoneae），禾 本科（Gramineae），稻属（Oryza）。 稻属内有20余种（参见附录A）。 5方法原理 疣粒稻可能以植株、谷粒、核酸等形式出入境。对于植株、谷粒样品，可通过显微镜观察疑似物种的 植株、小穗、外荐，根据形态特征（见附录A、附录B）进行初步鉴定；对于核酸等无形态特征的样品，根据 疣粒稻的TPI基因序列特异位点设计引物开展PCR检测，进行准确鉴定。 6仪器设备和试剂 6.1仪器和设备 液氮罐、纯水机、电子天平、水浴锅、高压灭菌器、高温干燥箱、离心机、电泳仪、PCR仪、电泳槽、显 微镜、扫描电镜、凝胶成像系统、高通量研磨机、涡旋震荡器、可调移液器（1000μL，200μL，100uL， 20μL,10μL,2.5μL)、可调移液器枪头离心管。 6.2试剂 浩息服务平台 PCR反应常用试剂、电泳试剂和核酸分子量标准等，均为分析纯或生化纯（另有规定的除外），水按 照GB/T6682规定的执行。 7 鉴定方法 7.1形态鉴定 7.1.1稻属植株形态特征 一年生或多年生草本。秆直立，丛生。 7.1.1.1叶 叶鞘无毛；叶舌长膜质或具叶耳；叶片线形扁平，宽大 7.1.1.2花 顶生圆锥花序疏松开展，常下垂。 2