ICS 13.300 CCS A 80 中华人民共和国国家标准 GB/T21796—2022 代替GB/T21796—2008 化学品 活性污泥呼吸抑制试验 Chemicals-Activated sludge respiration inhibition test 2023-02-01实施 2022-07-11发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T21796—2022 目 次 前言 范围 1 2 规范性引用文件 术语和定义 受试物信息 5 试验原理 6 参比物质/参比物· 7 试验方法 试验程序 质量保证与质量控制 10 数据与报告 附录A（资料性） 活性污泥呼吸抑制试验装置示例 附录B（资料性） 应用BOD瓶的氧测量装置示例 附录C（资料性） 抑制曲线示例 参考文献 GB/T21796—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21796—2008《化学品活性污泥呼吸抑制试验》，与GB/T21796—2008相比 除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： 更改了文件的适用范围（见第1章，2008年版的第1章）； 一更改了试验原理的内容（见第5章，2008年版的4.1）； 更改了参比物的内容（见第6章，2008年版的4.2）； 一更改了试验方法和试验程序的内容（见第7章、第8章，2008年版的第5章、第6章）； 一更改了质量保证与质量控制的部分内容（见第9章，2008年版的第7章）； 更改了数据与报告的内容（见第10章，2008年版的第8章）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251）提出并归口。 本文件起草单位：生态环境部固体废物与化学品管理技术中心、广东省微生物研究所、沈阳沈化院 测试技术有限公司、上海市检测中心、厦门丰力扬科技有限公司、生态环境部南京环境科学研究所、中国 检验检疫科学研究院、上海市环境科学研究院、陕西润正检测科技有限公司。 本文件主要起草人：刘纯新、韦洪莲、桑宇、曾国驱、窦从从、韩雪、陈晓倩、石利利、周丽丽、胡双庆 许丽红、汤保华。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： 2008年首次发布为GB/T21796—2008； ——本次为第一次修订。 1 GB/T21796—2022 化学品活性污泥呼吸抑制试验 1范围 本文件规定了化学品活性污泥呼吸抑制试验的受试物信息、试验原理、参比物质/参比物、试验方 法、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。 本文件适用于评价易溶于水、难溶于水、易吸附和具有挥发性的化学物质对生物法污水处理厂活性 污泥中微生物的有机碳氧化过程、硝化作用的影响。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T21845 化学品 水溶解度试验 GB/T21851 化学品 批平衡法检测 吸附/解吸附试验 GB/T21852 化学品 分配系数（正辛醇-水）高效液相色谱法试验 GB/T21853 化学品 分配系数（正辛醇-水）摇瓶法试验 GB/T21855 化学品 与pH有关的水解作用试验 GB/T22052 用液体蒸气压力计测定液体的蒸气压力 温度关系和初始分解温度的方法 GB/T 22228 工业用化学品【 固体及液体的蒸气压在10-1Pa至10Pa范围内的测定 静态法 GB/T22229 工业用化学品 固体及液体的蒸气压在10-8Pa至1Pa范围内的测定蒸气压平 衡法 OECD化学品测试导则No.104 蒸气压（VapourPressure） OECD化学品测试导则No.316 化学品在水中的光转化（PhototransformationofChemicalsin Water) 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 呼吸速率respirationrate 单位时间内活性污泥或污水中好氧微生物消耗的氧气量。 注：通常以每小时每升活性污泥悬浮液或污水消耗的氧气的量[mg/（L·h），或每小时每克活性污泥（干重）消耗 的氧气的量[mg/（g·h)】表示。 3.2 无可观察效应浓度 noobservedeffectconcentration;NOEC 未观察到效应的受试物浓度 4受试物信息 4.1受试物所需信息包括： 1 GB/T21796—2022 a) 标识信息（通用名、化学名或IUPAC名、CAS号），化学纯度； b) 水中溶解度（GB/T21845）； 常数； （P 正辛醇-水分配系数（GB/T21852和GB/T21853）； e) 吸附系数（Ka，K，或K，GB/T21851)； f) 水中的化学稳定性（水解性，GB/T21855）； g) 水中的光稳定性（光解性，OECD化学品测试导则No.316）； h) 水中浓度的定量分析方法。 4.2 2测定4.1中参数的温度应在试验报告中予以说明。 5试验原理 受试物与活性污泥和模拟污水接触3h后，在一个插人氧电极的密闭测氧容器中测定呼吸速率，进 而得出受试物对活性污泥呼吸抑制的EC（EC，是指在给定的暴露期内与空白对照组相比，对%受试 生物产生效应的浓度。例如，EC5o是在暴露期结束时对暴露群体中50%的个体在一个试验终点方面产 时间。如果受试物迅速减少（例如通过水解等非生物降解，或者挥发），可采用较短的暴露周期，例如 30min。在暴露当天，应用适当的参比物检查每批活性污泥的敏感性 通过测定N-烯丙基硫脲（ATU，一种抑制硝化细菌将铵氧化成亚硝酸盐的专用抑制剂）存在和不 存在时的呼吸速率，将微生物氧化有机碳的氧吸收抑制与微生物氧化铵的氧吸收抑制区分出来。这种 情况下，分别在加人和不加抑制剂ATU时，将含有受试物的试验组的耗氧速率与不含受试物的对照组 的平均耗氧速率相比，计算呼吸速率的抑制百分率。 可通过测定不含活性污泥时，仅含有受试物、模拟污水和水的非生物对照组混合液的耗氧速率，检 测非生物过程的耗氧作用。 6参比物质/参比物 应定期用适当的参比物进行试验，来检查试验方法和试验条件的可靠性，并在暴露当天检查用作微 生物接种物的每批活性污泥的敏感性。宜用3，5-二氯苯酚（3，5-DCP，一种已知的呼吸抑制剂，用于很 多类型的抑制/毒性试验）作为参比物。五水合硫酸铜也可用作总呼吸抑制的参比物。N-甲苯胺可用 作硝化作用的专用参比抑制剂。 7试验方法 7.1 仪器设备及试剂 7.1.1仪器设备 试验使用下列仪器设备： a)i 试验容器一一例如.1000mL烧杯，盛装500mL试验混合液（见图A.1）。 b) 测定溶解氧浓度的容器和附件一一匹配的氧电极；盛装试验混合液样品的无顶空密闭容器和 为避免插入氧电极时液体溢流损失，宜先在套管中插人漏斗或玻璃管，或者使用瓶口外展的容 2 GB/T21796—2022 器。应使用磁力搅拌器或其他搅拌方法，例如自搅拌电极 c） 磁力搅拌器和包裹惰性材料的搅拌子。 (P 曝气装置：用压缩空气曝气，应用适当的过滤器去除空气中的灰尘和油分，通过含水的洗瓶加 湿空气。容器内的混合液应用巴斯德（Pasteur）吸管或其他不吸附受试物的曝气头曝气。当 加载烧瓶时，例如2000mL容量，振荡器转速应在150r/min~250r/min，保证活性污泥需氧 量，同时避免受试物产生过多泡沫、挥发损失，或者曝气时难于被气流分散而被溅起。典型的 试验系统是一组连续曝气，按先后顺序设置（例如间隔10min～15min）的烧杯，然后按同样顺 序和时间间隔分析。也可使用经过验证的能同步曝气和测定混合液耗氧速率的仪器。 e)pH计。 f）离心机：用于离心处理活性污泥，加速度为10000m/s的台式离心机。 g) 实验室常用的其他设备和玻璃器血。 7.1.2试剂 整个试验过程使用分析纯试剂。 7.2试验用水 除明确要求使用除氯自来水的步骤以外，应使用溶解性有机碳（DOC含量低于1mg/L的蒸馏水 或去离子水。 7.3试验准备 7.3.1模拟污水贮备液的配制 分别称取16g蛋白陈、11g牛肉膏、3g尿素、0.7g氯化钠（NaCl)、0.4g二水合氯化钙（CaClz： 2HzO）、0.2g七水合硫酸镁（MgSO，·7H,O)和2.8g无水磷酸氢二钾（K，HPO.），用蒸馏水或去离子 水溶解，定容到1L，作为模拟污水贮备液。 此贮备液pH值应在7.5士0.5之间。如果配好的模拟污水贮备液不立即使用，应于0℃～4℃、黑 暗处储存，或者在不改变其成分的条件下储存，且不超过7d。 模拟污水贮备液各组分也可在储存前分别灭菌，或开始试验前再加入蛋白陈和肉膏。使用前，模拟 污水贮备液应充分搅拌均匀，必要时调节pH值在7.5土0.5之间。 7.3.2受试物贮备液的配制 对于易溶于水的受试物，应按溶解度配制成最大浓度的受试物贮备液（不应有析出）。如果受试物 属于难溶于水的物质、不同水溶性组分的混合物和易吸附物质，应直接称量加入每个试验容器。对于这 类受试物，如果在加人活性污泥前，分析测定每个试验容器中溶解的受试物浓度，也可采用配制贮备液 的方式。如果配制水融合组分（WAFs），应分析测定试验容器中溶解的受试物浓度。不应使用有机溶 剂、分散剂/乳化剂来提高受试物溶解度。当有足够的证据表明受试物在实验室条件下稳定，可在试验 前一天配制，使用超声处理受试物贮备液或预先搅拌悬浮液过夜 受试物可能会影响试验系统的pH值。预试验时，设置试验系列前，应测定受试物试验组混合液的