ICS 11.220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T19180—2020 代替GB/T19180—2003 牛海绵状脑病诊断技术 Diagnostic techniques for bovine spongiform encephalopathy 2020-12-14实施 2020-12-14发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T19180—2020 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替GB/T19180—2003《牛海绵状脑病诊断技术》。本标准与GB/T19180—2003相比，除 编辑性修改外，主要技术变化如下： 一增补了H·E组织病理染色法、免疫组织化学方法和免疫印迹方法的适用范围，删除了“也可 用于其他动物的传染性海绵状脑病的诊断”（见第1章）； 优化了临床症状的描述（见4.3）； 一优化了H·E组织病理染色法操作步骤（见5.1)和免疫组织化学方法操作步骤（见5.2）； 增补了免疫印迹方法（见5.3）。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。 本标准起草单位：中国动物卫生与流行病学中心 本标准主要起草人：王志亮、刘雨田、孙成友、田英、宋芳芳、邹艳丽、于小静、吴晓东、王树双。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T19180—2003。 1 GB/T19180—2020 引言 牛海绵状脑病（BovineSpongiformEncephalopathy，BSE）是由病毒引起的牛的一种慢性致死性 神经性疾病，对动物和人构成较大危害。世界动物卫生组织（OIE）将其列为严重影响国际贸易的动物 疫病之一，我国将其归为一类动物疫病。我国现行《牛海绵状脑病诊断技术》（GB/T19180一2003）系 症状、组织病理学、免疫组织化学等三种诊断方法，未包括OIE陆生动物手册指定的另一种确诊方法即 免疫印迹。免疫印迹方法比免疫组织化学方法更灵敏，特异性更好。因此，免疫印迹方法是牛海绵状脑 病诊断技术中一种更好的确诊方法，它能更好地服务于我国疯牛病的监测工作。 BSE分为典型BSE和非典型BSE。典型BSE是由于牛采食污染牛羊病毒的肉骨粉或者饲料而 引起，非典型BSE为自然发生的一种散发性BSE。自然条件下，BSE经由消化道传播，未发现水平和垂 直传播的证据。典型BSE的潜伏期一般为2年～8年，平均为4年～5年，多发于4～6岁的牛，2岁以 下罕见，6岁以上明显减少。根据病原的分子量大小，非典型BSE又分为H型和L型。非典型BSE的 平均发病年龄为11岁。BSE病程多为数月至一年，最终死亡。 大多数BSE病牛无典型临床症状，因此BSE的诊断应通过实验室检测来实现。BSE的病原是动 物机体内蛋白的异构体，在病牛血清里检测不到BSE病毒抗体，所以血清学检测方法对于BSE来 说是无意义的。目前，实验室诊断方法多以检测BSE病原为目的，包括免疫组织化学方法，免疫印迹方 法、ELISA方法等，其中免疫组织化学方法和免疫印迹方法是OIE手册规定的BSE确诊方法。BSE病 H·E组织病理染色法可以观察到这些病变情况。OIE手册规定H·E组织病理染色法是确诊BSE 的辅助方法，在使用免疫组织化学方法诊断BSE时应同时使用H·E组织病理染色法予以辅助确诊； 组织病理染色法予以辅助确诊。 Ⅱ GB/T19180—2020 牛海绵状脑病诊断技术 1范围 本标准规定了BSE诊断的临床诊断，实验室诊断及综合判定技术要求 本标准适用于BSE的诊断，其中临床诊断适用于BSE的监测和流行病学调查，H·E组织病理染 色法适用于BSE中枢神经系统的病理诊断，免疫组织化学方法和免疫印迹方法适用于BSE的病原学 诊断。 2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BSE：牛海绵状脑病（BovineSpongiformEncephalopathy） H·E：苏木精伊红（Hematoxylinandeosin) HRP：辣根过氧化物酶（Horseradishperoxidase） PBS：磷酸盐缓冲溶液（Phosphatebufferedsolution） PK酶:蛋白酶K(ProteinaseK) PVDF：聚偏氟乙烯（Polyvinylidenefluoride) SDS：十二烷基硫酸钠（Sodiumdodecylsulfate） TBST：等渗缓冲盐溶液(Tris-HClbuffered solutionwithTween) 3临床诊断 3.1易感动物 牛科和猫科动物，包括各种牛、各种羊和各种猫科动物。 3.2临床症状 3.2.1行为异常 表现为不安、恐惧、异常震惊或沉郁；不自主运动，如磨牙、震颤；不愿经过有缝隙的地面或进人畜 栏等。 3.2.2 感觉或反应过敏 表现为视、听、触三觉过于敏感。对光线的明暗变化、外部声响以及颈部触摸过度敏感，这是BSE 病牛的特征性临床表现。 3.2.3 运动异常 病牛步态呈“鹅步”状，共济失调，四肢伸展过度，有时倒地，难以站立。 3.2.4体重和体况下降 病牛的体重和体况下降，表现出异常消瘦，体质虚弱。 1