ICS 07.080 A21 中华人民共和国国家标准 GB/T38569—2020 工业微生物菌株质量评价 拉曼光谱法 Performance evaluation of industrial microorganism strain- Raman spectroscopy 2020-03-31实施 2020-03-31发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T38569—2020 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准主要起草人：马波、籍月彤、何日辉、李融、徐健、马爱进。 GB/T38569—2020 工业微生物菌株质量评价 拉曼光谱法 1范围 本标准规定了用拉曼光谱法评价工业微生物菌株质量的方法。 本标准适用于工业发酵用细菌、真菌、微藻等相对于参考菌株的质量一致性评价。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T 6682 2分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 工业微生物菌株质量评价performanceevaluationof industrialmicroorganism strain 利用拉曼光谱法开展工业微生物菌株质量一致性评价。 3.2 参考菌株 卡referencestrain 发酵性能明确，用于发酵生产的经过鉴定的保存菌株 4原理 细胞内部化合物拉曼光谱的叠加信息可以反映该细胞的综合表型，通过比较待评价菌株与参考菌 株单细胞拉曼光谱的相似性，可以判断待评价菌株是否具有与参考菌株可比较的发酵性能 5试剂或材料 5 除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的二级水。 5.1无菌培养基 按照菌种类型配制，或选用相应商品化培养基。 5.2载玻片 氟化钙载玻片（25mm×75mm）。 6 仪器设备 试验中所使用的仪器设备为： 1 GB/T38569—2020 a) 显微拉曼光谱仪：光谱分辨率不低于5cm-，拉曼位移波数范围至少包含400cm-~ 1 850 cm²; b）培养箱； c）摇床； d) 离心机。 7测定步骤 7.1 菌株活化 长出单菌落：分别挑取3个参考菌株和3个待评价菌株单菌落，接种至含有5mL液体培养基的试管 中，根据生产工艺参数选择相应的温度和转速，培养至对数期。 7.2菌株培养 体培养基的容器中，根据生产工艺参数选择相应的温度和转速，培养至稳定期。 7.3样品前处理 7.3.1分别移取培养后的参考菌株和待评价菌株各1mL至无菌管中。 7.3.2选择相应的转速离心，弃掉上清，加入1mL无菌双蒸水，混匀菌体。 释后的菌液，在洁净的氟化钙载玻片上点样，无菌环境下室温风干 7.4测量 切换至光谱采集模式，测定拉曼光谱信号 7.4.2每个样本随机选取至少20个单细胞作为样品信号。 7.4.3在点样区内，采集3个无细胞处信号，并计算平均值，作为背景信号。 7.5数据处理 7.5.1对单细胞拉曼光谱原始数据进行背景信号扣除（样品信号减去背景信号）、基线校正（>5阶函 数）和基于面积的归一化处理 7.5.2计算信噪比，其中信号采用1001cm-处的尖锐拉曼峰对应的信号强度，舍弃信噪比小于3的 数据，补充数据个数，使得待评价菌株组和参考菌株组具有相同的数据个数。 8结果计算和分析 8.1 结果计算 8.1.1余弦距离按式（1）计算： 2