ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T 17815—2018 代替GB/T17815—1999 饲料中丙酸、丙酸盐的测定 Determination of propionic acid,propionate in feeds 2019-04-01实施 2018-09-17发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T17815—2018 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替GB/T17815—1999《饲料中丙酸、丙酸盐的测定》。 变化如下： 增加方法的检出限和定量限（见第1章）； 修改了试样溶液制备中磷酸的浓度（见3.5.1，1999年版7.1）； 一增加了试样溶液制备中的试剂石英砂和甲酸（见3.5.1)； 气相色谱柱由填充柱改为毛细管柱，色谱条件也相应改变，定量由内标法改为外标法（见 3.5.3,1999年版7.2）； 增加了液相色谱法； 一结果表述单位由“%”改为"mg/kg"（见3.6，1999年版第8章）； 增加了资料性附录 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)提出并归口。 本标准起草单位：国粮武汉科学研究设计院有限公司[国家饲料质量监督检验中心（武汉）。 本标准主要起草人：刘小敏、高俊峰、黄昌郡、王思思。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T17815—1999。 1 GB/T178152018 饲料中丙酸、丙酸盐的测定 1范围 本标准规定了饲料中丙酸、丙酸盐的气相色谱和高效液相色谱测定方法。 本标准适用于丙酸含量在3000mg/kg以下的饲料原料、配合饲料、浓缩饲料中丙酸、丙酸盐（以丙 酸计）的测定。 本标准中的气相色谱法的检出限为30mg/kg，定量限为100mg/kg；高效液相色谱法的检出限为 30mg/kg，定量限为100mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3气相色谱法（仲裁法） 3.1原理 试样中的丙酸、丙酸盐经磷酸酸化，丙酸盐转化为丙酸，水蒸气蒸馏将丙酸与基质分离，馏出液中的 丙酸经气相色谱仪氢火焰离子化检测器检测，外标法定量。 3.2 2试剂或材料 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂。 3.2.1水,GB/T6682，一级。 3.2.2 磷酸：优级纯。 3.2.3氯化钠。 3.2.4石英砂。 3.2.5硅油。 3.2.6磷酸溶液（1+1）：量取50mL磷酸用水稀释至100mL，混匀。 3.2.7甲酸溶液（2+98）：移取2mL甲酸用水稀释至100mL，混匀 3.2.8丙酸标准贮备溶液：准确称取1.0310g丙酸（CH.O2，纯度≥97%）于100mL容量瓶中，加水 溶解并定容，摇匀。此液1mL含10mg丙酸，此溶液在4℃可保存30d。 3.2.9丙酸标准工作溶液：移取丙酸标准贮备溶液（3.2.8)10.0mL置于100mL容量瓶中，用水稀释定 容。此液1mL含1mg丙酸，临用现配。 3.2.10 0.45μm滤膜。 3.3仪器设备 3.3.1气相色谱仪：带氢火焰离子化检测器。 1 GB/T17815—2018 3.3.2水蒸气蒸馏装置：具500mL蒸馏烧瓶。 3.3.3分析天平：感量0.0001g和0.1g。 3.4样品 按GB/T14699.1采样，按GB/T20195制备试样，粉碎后过0.42mm孔径的分析筛，混勾后装入 密闭容器中备用。 3.5试验步骤 3.5.1试样溶液的制备 平行做两份试验，准确称取50g试样（精确至0.1g）置于500mL的蒸馏瓶中，迅速加入200mL 水，80g氯化钠（3.2.3），10mL磷酸溶液（3.2.6），10g石英砂（3.2.4）及2~3滴硅油（3.2.5），立即进行水 蒸气蒸馏，将250mL容量瓶置于冰水浴中作为吸收液装置，蒸馏直至馏出液接近240mL时停止。将 容量瓶室温下放置30min，加1.0mL甲酸溶液（3.2.7），用水定容。充分摇匀后用0.45um的滤膜过滤 待测。 3.5.2标准系列溶液的制备 准确移取丙酸标准工作溶液（3.2.9）2.5mL、5.0mL，丙酸标准贮备溶液（3.2.8）1.0mL、2.5mL、 5.0mL、10.0mL置于500mL蒸馏瓶中，迅速加人200mL水，80g氯化钠（3.2.3），10mL磷酸溶液 （3.2.6），立即进行水蒸气蒸馏，将250mL容量瓶置于冰水浴中作为吸收液装置，蒸馏直至馏出液接近 240mL时停止。将容量瓶在室温下放置30min，加1.0mL甲酸溶液（3.2.7），用水定容，摇匀后用 0.45μm的滤膜过滤，其丙酸标准溶液最终浓度分别为10.0.μg/mL、20.0ug/mL、40.0μg/mL、 100.0μg/mL.200.0μg/mL.400.0μg/mL. 3.5.3参考气相色谱条件 谱柱。 载气：氮气，纯度99.99%。 载气流速：1.0mL/min。 进样口温度：250℃。 分流比：5：1。 检测器温度：250℃。 柱温箱温度：110℃保持5min，然后以10℃/min的速率升到180℃，保持5min。 进样量：1L。 3.5.4测定 在上述气相色谱条件下，将内酸标准系列溶液及试样液注人气相色谱仪测定，采用单点或多点校 正，外标法定量。标准溶液色谱图参见附录A中的图A.1。 3.6试验数据处理 丙酸含量以质量分数i计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算： wi=cxV :(1) m 2 GB/T17815—2018 式中： 丙酸标准溶液中丙酸浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V一一蒸馏液的体积，单位为毫升（mL）； m—试样质量，单位为克（g）。 测定结果用平行测定结果算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。 丙酸盐含量以丙酸计。 3.7精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该平均值的15%。 4 高效液相色谱法 4.1原理 试样中的丙酸、丙酸盐经磷酸酸化，水蒸气蒸馏（丙酸盐转化为丙酸）与基质分离，馏出液经液相色 谱仪紫外检测器检测，外标法定量。 4.2 试剂或材料 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂。 4.2.1水,GB/T6682一级。 4.2.2磷酸：优级纯。 4.2.3乙睛：色谱纯。 4.2.4硅油。 4.2.5 氯化钠。 4.2.6 石英砂。 4.2.7 磷酸溶液（1+1）：量取50mL磷酸用水稀释至100mL，混匀。 4.2.8 甲酸溶液（2十98）：移取2mL甲酸用水稀释至100mL，混匀。 4.2.9磷酸氢二铵缓冲液（pH=3.0）：称取1.5g磷酸氢二铵，加水溶解并定容至1000mL，用磷酸溶 液（4.2.7)调节pH值3.0左右，临用现配。 4.2.10 丙酸标准贮备溶液：准确称取1.0310g丙酸（C.H.O2，纯度≥97%）于100mL容量瓶中，加水 溶解并定容，摇匀。此液1mL含10mg丙酸，此溶液在4℃可保存30d。 4.2.11丙酸标准工作溶液：移取丙酸标准贮备溶液（4.2.10）溶液10.0mL置于100mL容量瓶中，用水 稀释定容。此液1mL含1mg丙酸，临用现配。 4.2.120.45μm滤膜 4.3 仪器设备 4.3.1高效液相色谱仪：配紫外检测器。 4.3.2水蒸气蒸馏装置：具500mL蒸馏烧瓶。 4.3.3分析天平：感量0.0001g和0.1g。 4.3.4 pH计。 4.4样品 按GB/T14699.1采样，按GB/T20195制备试样，粉碎后过0.42mm孔径的分析筛，混匀后装入 密闭容器中备用。 3 GB/T17815—2018 4.5 5试验步骤 4.5.1 试样溶液的制备 同3.5.1。 4.5.2标准系列溶液的制备 同3.5.2。 4.5.3参考液相色谱条件 色谱柱：Cls柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5um或等效色谱柱； 流动相：量取磷酸氢二铵缓冲液（4.2.9）980mL，加入乙腈（4.2.3）20mL，混匀 流速：1.0mL/min； 柱温：30℃； 波长：214nm 进样量：10μL~20μL。 4.5.4测定 在上述液相色谱条件下，将丙酸标准系列溶液及试样液注入液相色谱仪测定，采用单点或多点校 正，外标法定量。标准溶液色谱图参见图A.2。 4.6 试验数据处理 丙酸含量以质量分数2计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（2）计算： _cxV W2 m 式中： c——丙酸标准溶液中丙酸浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)； V一蒸馏液的体积，单位为毫升（mL)； m一试样质量，单位为克（g）。 丙酸盐含量以丙酸计。 4.7 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该平均值的15%。 4 GB/T 17815—2018 附录A （资料性附录） 丙酸标准溶液色谱图 丙酸标准溶液气相色谱图和高效液相色谱图分别见图A.1和图A.2。 200 175 J 150 125 响应 75J 1-内酸-10.145 50 3 25 J 0J 0'0 2. 0 4.0 6. 0 8. 0 10.0 12.0 14.0 16. 017. 0 t/min 图 A.1 丙酸标准溶液100μg/mL的气相色谱图 0. 009 29001 0. 009 0 0. 008 0. 00