ICS 65.020.01 B 16 中华人民共和国国家标准 GB/T19495.4—2018 代替GB/T19495.4—2004 转基因产品检测 实时荧光定性聚合酶链式反应（PCR） 检测方法 Detection of genetically modified organisms and derived products- Qualitative real-time polymerase chain reaction(PCR) methods 2019-04-01实施 2018-09-17发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T19495.4—2018 前言 GB/T19495《转基因产品检测》分为如下几部分： GB/T19495.1 转基因产品检测 通用要求和定义； GB/T19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求； GB/T 19495.3 转基因产品检测 核酸提取纯化方法； -GB/T19495.4 转基因产品检测 实时荧光定性聚合酶链式反应（PCR）检测方法； GB/T 19495.5 转基因产品检测 实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测方法； —GB/T19495.6 转基因产品检测 基因芯片检测方法； GB/T19495.7 转基因产品检测 抽样和制样方法； -GB/T19495.8转基因产品检测 蛋白质检测方法； GB/T 19495.9 转基因产品检测 植物产品液相芯片检测方法 本部分为GB/T19495的第4部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本部分代替GB/T19495.4一2004《转基因产品检测 可核酸定性PCR检测方法》。与GB/T19495.4 2004相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下： 增加了植物内源基因的检测方法； 一增加了转基因植物筛选基因的检测方法； 一删除了结构基因检测方法，增加了大豆、玉米、油菜籽、棉花、水稻、马铃薯、亚麻和甜菜等作物 的品系特异性检测方法。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)提出并归口。 民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境 检验检疫局。 本部分主要起草人：黄新、高宏伟、李想、凌杏园、朱水芳、陈洪俊、潘良文、曹际娟、章桂明。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T19495.4—2004。 GB/T19495.4—2018 转基因产品检测 实时荧光定性聚合酶链式反应（PCR） 检测方法 1范围 GB/T19495的本部分规定了植物及其加工产品中转基因成分筛选和品系检测实时荧光定性聚合 酶链式反应（PCR)检测方法有关的仪器设备、试剂和材料、检测步骤、质量控制、防污染措施以及方法的 最低检出限。 本部分适用于大豆、玉米、油菜、水稻、棉花、马铃薯、亚麻、甜菜、首、番茄、木瓜、苹果、菊苣、剪股 颖、烟草、李子、甜瓜、小麦、茄子和桉树等植物转基因筛选检测，也适用于大豆、玉米、油菜、棉花、水稻、 马铃薯、亚麻、甜菜和木瓜等植物的品系特异性检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法 GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 转基因 transgene 将物种本身具有的或来源于其他物种的功能DNA序列，通过生物工程技术，使其在该物种中进行 转录或表达，以便使该物种获得新的品种特征的技术 3.1.2 实时荧光PCR real-timepolymerasechain reaction 实时荧光聚合酶链式反应。在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测 整个PCR进程，并通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 注：荧光信号的强弱直接反映模板数量。 3.1.3 内源基因endogenousgene 在检测物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因。 注：该基因可用于判定物种特异性。 1 GB/T19495.4—2018 3.1.4 外源基因exogenousgene 利用生物工程技术转人的其他生物基因。 注：转入外源基因后，该生物品种表现新的生物学性状。 3.1.5 Ct值cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 3.2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 Alfalfa-Acc：首乙酰辅酶a羧化酶（AlfalfaAcetyl-CoAcarboxylase） BAR：磷化麦黄酮乙酰转移酶基因（phosphinothricinacetyltransferasegene） bp：碱基对（basepair） strain CP4 Product:herbicide tolerant form of 5-enolpyruvulshikimate-3-phosphate synthase) CryIA（c）：苏云晶芽孢杆菌杀虫蛋白CryIA（c）基因［Bacillus thuringiensis（Bt）subsp. Kurstaki crystal protein I A(c)] Cry3A：苏云晶芽孢杆菌杀虫蛋白Cry3A基因［Bacillusthuringiensis（Bt）subsp.Tenebrionis crystal protein 3AJ CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammoniumbromide） DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid) dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosinetriphosphate） dCTP：脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidinetriphosphate） dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosinetriphosphate） dNTP：脱氧核苷三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphate） dUTP：脱氧尿苷三磷酸（deoxyuridinetriphosphate） EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid) EPSPS：5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因（5-enolpyruvylshikimate-3-phosphatesynthasegene） GAG56：一种醇溶蛋白基因（oneof-gliadingenes） GLuA3：大米谷蛋白基因（riceglutelingene） GOX：草甘麟氧化还原酶基因（glyphosateoxidoreductasegene） LAT52：花粉特异蛋白LAT52基因 Lectin：植物凝集素基因 NPTⅡ：新霉素-3'-磷酸转移酶基因（neomycin-3'-phosphotransferasegene) PAT：草丁膦乙酰转移酶基因（phosphinothricin acetyltransferase gene) PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction） PLD：磷脂酶D家族基因（phospholipaseDfamilygene） PMI：6-磷酸甘露糖异构酶基因（phosphomannose-isomerasegene） pCaMV35S：花椰菜花叶病毒35S启动子（35Spromoterfromcauliflowermosaicvirus） pFMV35S：玄参花叶病毒35S启动子（35Spromoterfromamodifiedfigwortmosaicvirus） pNOS：来源于农杆菌的胭脂碱合成酶基因启动子（promoterof nopalinesynthasegenefrom Agrobacterium tumefaciens) pSSuAra：来自拟南芥的小亚基启动子（thesmallsubunitpromoterofArabidopsis） 2 GB/T19495.4—2018 pTA29：来源于烟草的花蕊特异性TA29基因的发育调节启动子（developmentallyregulatedpro moter from anther-specific TA29 gene from Nicotiana tabacum) pUbi玉米泛素基因的启动子（promoterofmaizeUbiquitin） SDS：十二烷基磺酸钠（sodiumdodecylsulfate） SPS：蔗糖磷酸盐合成酶基因（sucrosephosphate synthasegene） Taq:DNA聚合酶(Taq DNA polymerase) TE：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、乙二胺四乙酸二钠缓冲液（Tris-HCI、EDTAbuffer) tE9：为来源于豌豆二磷酸核酮糖羧化酶基因的终止子 Tris：三（羟甲基）氨基甲烷[tris(hydroxymethyl）aminomethane] tg7：谷氨酰胺转移酶7基因（transglutaminase7gene） tNOS：来源于农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子（terminatorofnopa