ICS 65.120 B 46 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 25174—2010 饲料添加剂 4',7-二羟基异黄酮 Feed additive4',7-dihydroxyisoflavone 2010-09-26发布 2011-01-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 25174—2010 前言 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位：南京农业大学、中牧实业股份有限公司。 本标准主要起草人：倪迎冬、杨晓静、赵茹茜、陈杰、付光武、王珍芹、王丽娜 1 GB/T25174—2010 饲料添加剂4°，7-二羟基异黄酮 1范围 本标准规定了饲料添加剂4'，7-二羟基异黄酮的要求、试验方法、检验规则以及标签、包装、运输和 贮存的要求 本标准适用于以间苯二酚、对羟基苯乙酸和原甲酸三乙酯为主要原料经化学合成的饲料添加剂 4'°,7-二羟基异黄酮。 化学名称：4°7-二羟基异黄酮 英文名称：4',7-dihydroxyisoflavone（daidzein) 分子式：C1sH1oO4 相对分子质量：254.24（2005年国际相对原子质量） 化学结构式： HO OH 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T191包装储运图示标志 GB/T 6435 饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB10648 饲料标签 GB/T13079 饲料中总砷的测定 GB/T 13080 饲料中铅的测定原子吸收光谱法 GB/T 14699.1 饲料采样 3要求 3.1性状 本品为白色或类白色粉末，无臭、无味。熔点：315℃～323℃。易溶于二甲基甲酰胺，微溶于乙 醇,不溶于水。 3.2技术指标 技术指标应符合表1规定。 1 GB/T25174—2010 表1技术指标 项 目 指标 4',7-二羟基异黄酮/% ≥97.5 水分/% ≤1.0 炽灼残渣/% ≤0.1 总砷/(mg/kg) ≤1 铅/(mg/kg) <2 试验方法 4.1抽样 按GB/T14699.1进行。 4.2主要仪器和设备 4.2. 1 高效液相色谱仪，带紫外检测器。 4.2.2 超声波振荡器。 4.2.3 分析天平，感量0.01mg。 4.2.4 马福炉。 4.3试剂和溶液 除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为去离子水，符合GB/T6682中规定的二级水 4.3.1 三氯化铁。 4.3.2 铁氰化钾。 4.3.3 乙醇：色谱纯。 4.3.4 甲醇：色谱纯。 4.3.5 85%乙醇溶液（乙醇和水的体积比为85：15）。 4.3.655%甲醇溶液（甲醇和水的体积比为55：45）。 4. 3.7 标准样品：4°，7-二羟基异黄酮（含量≥98.0%）。 4.3.8标样工作液：精密称取标准品0.02g~0.04g（精确至0.01mg），置于100ml的容量瓶中，加 入85%乙醇溶液适量，超声波振荡5min使试样溶解。用85%乙醇溶液定容至刻度，摇匀，于4℃下保 存备用,有效期一周。 4.4鉴别 4.4.1称取试样0.2mg，置小试管中，加乙醇溶液0.2mL，在水浴锅上加热65℃士5℃使溶解，加人 0.5%三氯化铁试液10滴，混勾，再加人0.5%铁氰化钾试液10滴，立即出现兰绿色。 4.4.2在含量测定项下记录的高效液相色谱中，样品主峰的保留时间与标准品峰的保留时间一致。 4.54',7-二羟基异黄酮含量的测定 4.5.1方法提要 试样用85%乙醇溶液溶解，注人高效液相色谱仪反相色谱仪中进行分离，紫外检测器检测，外标法 定量。 4.5.2液相色谱操作条件 液相色谱操作条件如下： 色谱柱：Ci8柱：内径4.6mm，长250mm，粒度5um； 检测波长：249nm； 流动相：55%甲醇，等浓度洗脱； 一流速：1.0mL/min; 2 GB/T 25174—2010 进样体积：10μL。 4.5.3测定步骤 4.5.3.1试样溶液的制备 精密称取试样0.02g~0.04g（精确至0.01mg），置于100mL容量瓶中，加人85%乙醇溶液适 量，超声波振荡5min使试样溶解。用85%乙醇溶液定容至刻度，摇匀，过0.45um微孔滤膜。 4.5.3.2测定 按高效液相色谱仪说明书调整色谱的工作参数，向液相色谱柱中依次注人标样工作液（4.3.8)和试 样溶液（4.5.3.1），得到色谱峰面积的响应值，用外标法定量。 4.5.4计算与结果表示 试样中4，7-二羟基异黄酮Wi以质量分数表示，数值以%表示，按式（1)计算： Az · mi w? 102 .(1) A:mz 式中： 试样溶液中4.7-二羟基异黄酮峰面积； 标样的质量，单位为克（g)； mi W2 标样中4°，7-二羟基异黄酮的含量，%； Ar 标样溶液中4°,7-二羟基异黄酮峰面积； 试样的质量，单位为克（g）。 m2 4.5.5允许差 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差应不大于5%。 4.6水分测定 按GB/T6435执行。 4.7炽灼残渣测定 4.7.1测定步骤 称取1.0g试样（精确至0.01g），置于已在750℃土50℃炽灼至恒重的瓷埚内，展平。先用小火 缓缓加热至完全炭化，放冷后，加浓硫酸0.5mL～1.0mL，使其湿润，低温加热至硫酸蒸汽除尽后移人 马福炉中，在750℃土50℃中炽灼至恒重。 4.7.2计算 炽灼残渣203以质量分数表示，数值以%表示，按式（2)计算： m3-m×100 m ....(2) m, 式中： 埚与残渣总质量，单位为克（g)； m3- m 埚质量，单位为克（g）； ms- 样品质量，单位为克（g）。 4.8总砷测定 按GB/T13079执行。 4.9铅含量测定 按GB/T13080执行。 5检验规则 5.1出厂检验 5.1.1出厂检验项目 性状、4',7-二羟基异黄酮含量。