ICS 71.040 N 04 中华人民共和国国家标准 GB/T 32268—2015 十八烷基键合相（C18）高效液相色谱柱 性能测定方法 Method of performance testing for octadecyl bonded(C18) high performance liquid chromatography(HPLC) column 2015-12-10发布 2016-07-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T32268—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出， 本标准由全国仪器分析测试标准化技术委员会（SAC/TC481）归口。 本标准负责起草单位：天津博纳艾杰尔科技有限公司。 本标准参加起草单位：中国分析测试协会、北京大学、中国科学院化学研究所、中国计量科学研究 院、中国食品药品检定研究院、北京有色金属研究总院、沃特世科技（上海）有限公司、大连依利特分析仪 器有限公司、北京金欧亚科技发展有限公司。 本标准主要起草人：王宛、汪群杰、赵羽、张学云、张庆合、刘国铨、刘虎威、胡昌勤、汪正范、蔡会霞、 汪若梅。 I GB/T32268—2015 十八烷基键合相（C18高效液相色谱柱 性能测定方法 1范围 本标准规定了十八烷基键合相高效液相色谱柱（简称“C18HPLC柱”）性能的测定方法。 本标准适用于C18HPLC柱性能的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T9008液相色谱法术语柱色谱法和平面色谱法 GB/T32267分析仪器性能测定术语 JJG705液相色谱仪检定规程 3术语和定义 GB/T9008和GB/T32267界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 十八烷基键合相（C18）高效液相色谱柱 octadecyl bonded high performance liquid chromatography column 装有键合十八烷基的固定相的高效液相色谱柱。 3.2 柱内径 column internal diameter 色谱柱柱管的内径。 3.3 疏水保留因子 retention factor of hydrophobicity αn 表征C18固定相的C18烷基链的相对数量的参数，与填料颗粒的比表面积和表面碳覆盖率有关。 3.4 疏水选择性因子 selectivityfactor of hydrophobicity α hp 有关。 3.5 立体选择性因子 steric selectivity factor ass 表征C18固定相对被分离物质分子形状的选择识别能力的参数，与填料颗粒表面的官能团键合度 GB/T32268—2015 和碳覆盖率有关。 3.6 氢键容量因子hydrogenbondingcapacityfactor αH 表征C18固定相的氢键作用的参数，与纯水中填料颗粒表面残留的游离硅羟基数量有关。 3.7 总离子交换容量因子 total ion exchange capacity factor αB 表征C18固定相在pH7.60的流动相中离子交换能力的参数，与填料颗粒表面的硅羟基数量及其 他离子交换位点的数量有关。 3.8 酸性环境中离子交换容量因子ionexchangecapacityfactorinacidicsolution αA 表征C18固定相在pH2.60的流动相中离子交换能力的参数，与在pH2.60时填料颗粒表面的离 子交换位点的数量有关。 3.9 金属活性因子 metal activity factor αM 表征C18固定相表面杂质金属的含量及配位能力的参数 3.10 酸性化合物选择性因子selectivityfactorforacidiccompound asA 表征C18固定相对酸性化合物和中性化合物的分离能力的参数。在实际测定中，其下标中可标示 出具体测定物质的名称，如αs苯酚。 3.11 碱性化合物选择性因子selectivityfactorforbasiccompound α sB 表征C18固定相对碱性化合物和中性化合物的分离能力的参数。在实际测定中，其下标中可标示 出具体测定物质的名称，如αs阿米替林。 SAG 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂的级别应不低于分析纯级，水的级别符合GB/T6682一级水的规定。 甲醇(CH;OH)：色谱纯。 4.2 乙腈（CH,CN）：色谱纯。 4.3 磷酸二氢钾（KH,PO）。 4.4 磷酸(H;PO4)。 4.5 氢氧化钠(NaOH)。 4.6 氢氧化钾（KOH)。 4.7 三氟乙酸（CF:COOH)。 4.8 三乙胺(C,His N)。 4.9 尿嘧啶(C,H,N,O,）。 4.10 正丁基苯（CioH）。 2 GB/T32268—2015 4.11正戊基苯（CuH）。 4.12 邻三联苯（Ci8Hi4）。 4.13 3苯并菲（C18H2）。 4.14 咖啡因（CH1oN,O2）。 4.15 苯酚(C.H,OH)。 4.16 苯胺（CH,NHz）。 4.17 2,3-二羟基萘（CioHO2)。 4.18 2,7-二羟基萘(CloHgO2)。 4.19 阿米替林（C2H2sN）。 4.20尿苷(CgHi2NzOg)。 4.21氢氧化钠调节液 称取4.00g氢氧化钠，溶于10.0mL水中。 4.22氢氧化钾调节液 称取5.60g氢氧化钾，溶于10.0mL水中。 4.23磷酸盐缓冲液（pH2.60 称取1.36g磷酸二氢钾，置于合适的烧杯中，溶解于480.0mL水，用浓磷酸调节pH值至2.60，然 后转移并定容于500.0mL的容量瓶中，得到pH2.60的磷酸二氢钾缓冲液。 4.24磷酸盐缓冲液（pH5.80) 称取1.36g磷酸二氢钾，置于合适的烧杯中，溶解于480.0mL水，用氢氧化钾调节液（4.22）调节 pH值至5.80，然后转移并定容于500.0mL的容量瓶中，得到pH5.80的磷酸二氢钾缓冲液。 4.25磷酸盐缓冲液（pH7.60） 称取1.36g磷酸二氢钾，置于合适的烧杯中，溶解于480.0mL水，用氢氧化钾调节液（4.22）调节 pH值至7.60，然后转移并定容于500.0mL的容量瓶中，得到pH7.60的磷酸二氢钾缓冲液。 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪 高效液相色谱仪应符合JJG705的规定，并满足以下各项要求： a）检测器 采集频率的设定办法为： 1）当测试普通液相色谱柱时，检测器的流通池体积不大于15μL，采集频率不小于10Hz。 2）当测试超高效液相色谱柱时，检测器的流通池体积不大于5μL，采集频率不小于20Hz。 注：超高效液相色谱柱指装填有基于亚2um硅胶基质或亚3um核壳式硅胶基质的固定相的液相色谱柱。此处所 述硅胶基质包括碳杂化硅胶基质。 b）柱温箱 高效液相色谱仪需配备柱温箱，其温度设定值最大允许误差为士2℃，温度稳定性为不大于 1 ℃/h. c）i 连接管线 色谱柱需要通过材质为PEEK或者不锈钢的连接管线连接到进样器和检测器之间。色谱柱 和进样器或者检测器之间的连接管线的长度均不超过25cm。连接管线的内径尺寸根据色谱 柱的内径尺寸进行选择： 1）当色谱柱的柱内径小于2.1mm时，连接管线的内径为0.13mm。 3