(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210445728.X (22)申请日 2022.04.26 (71)申请人 重庆大学附属肿瘤医院 地址 400030 重庆市沙坪坝区汉渝路181号 (72)发明人 郭变琴　吴立翔　王卉　刘南京　 吴翊　 (74)专利代理 机构 重庆一叶知秋专利代理事务 所(普通合伙) 50277 专利代理师 刘洪雨 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6841(2018.01) (54)发明名称 一种结直肠癌化疗药物敏感性预测标志物 探针及应用 (57)摘要 本发明属于基因检测技术领域， 具体公开了 一种结直肠癌化疗药物敏感性预测标志物探针， 包括用于检测PHLPP1和PHLPP2的PHLPP探针， 用 于检测PHLPP1的探针核苷酸序列为SEQ  ID NO.1 至SEQ ID NO.8中的一个或两个以上； 用于检测 PHLPP2的探针核苷酸序列为SEQ  ID NO.9至SEQ   IDNO.16中的一个或两个以上。 本发明还公开了 上述探针用于检测结直肠癌化疗药物敏感性预 测标志物的检测方法， 以及上述探针及其检测方 法在制备检测试剂盒中的应用。 本发 明公开的探 针能够通过检测外周血CTC中PHLPP  mRNA水平以 预测患者对奥沙利铂、 5 ‑氟尿嘧啶、 卡培他滨等 化疗药物的敏感性， 以及识别不同表型外周血 CTC中PHLP P mRNA表达水平。 权利要求书1页 说明书9页 序列表11页 附图1页 CN 114774545 A 2022.07.22 CN 114774545 A 1.一种结直肠癌化疗药物敏感性预测标志物探针， 其特征在于， 包括用于检测PHLPP1 和PHLPP2的PHLPP探针， 用于检测PHLPP1的探针核苷酸序列为SEQ  ID NO.1至SEQ  ID NO.8 中的一个或两个以上； 用于检测PHLPP2的探针核苷酸序列为SEQ  ID NO.9至SEQ  ID NO.16 中的一个或两个以上。 2.根据权利要求1所述的探针在制备检测试剂盒中的应用。 3.根据权利要求1或2所述的探针用于检测结直肠癌化疗药物敏感性预测标志物的检 测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 采用滤膜截留外周血CTC； S2′、 采用PHLP P探针在外周血CTC中检测PHLP P mRNA的表达情况。 4.根据权利要求3所述的检测方法在制备检测试剂盒中的应用。 5.一种结直肠癌化疗药物敏感性检测试剂盒， 其特征在于， 包括用于检测PHLPP1和 PHLPP2的PHLP P探针。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774545 A 2一种结直肠癌化疗药物敏感性预测标志物探针及应用 技术领域 [0001]本发明属于基 因检测技术领域， 尤其涉及 一种结直肠癌化疗药物敏感性预测标志 物探针及应用。 背景技术 [0002]结直肠癌(Colorect al cancer,CRC)是威胁人类健康的主要恶性肿瘤之一， 2020 年全球癌症数据显示， CRC发病率占全球所有癌症的10.0％， 死亡率占癌症死亡总数的 9.4％； 在中国， CRC的新发病人数仅次于肺癌， 成为第二大癌症。 流行病学数据显示， 近年 来， 我国CRC的发病 率和死亡率均呈上升趋势。 CRC临床表现主要为排便习惯的改变， 腹痛， 贫血和肠出 血。 但大多数病人早期无明显症状， 导 致CRC病人初诊时多为中晚期。 [0003]目前针对中晚期无法手术切除和不适合使用免疫治疗的C RC患者的治疗方式仍然 以化疗为主。 最新NCCN(美国国立 综合癌症网络)更新的2021第二版(V2)肠癌 指南仍然推荐 使用FOLFOX(奥沙利铂(Oxaliplatin)+亚叶酸钙 +5‑氟尿嘧啶(5 ‑Fluorouracil， 5 ‑FU))或 CAPEOX(奥沙利铂+卡培他滨)作为主 要的辅助治疗手段。 [0004]近年来， 以循环肿瘤细胞(circulating  tumor cell， CTC)分型检测为代表的液体 活检技术是肿瘤研究领域的一个新兴方向， 在肿瘤患者早期诊断、 分期、 疗效监测、 预测评 估方面均显示出较好的应用价值。 大部分中晚期CRC患者在接受化疗后会复发， 5年生存率 低于15％， 而化疗耐药 是导致患者预后差和复发的主 要原因。 [0005]现有的技术手段主要通过组织活检或血液样本对某些与肿瘤药物相关的基因(例 如TS基因、 MTHFR基因等)进行检测来预测患者对化疗药物敏感性， 然而组织活检取样难度 大且不能反复多次取样， 因而不利于动态评估耐药情况； 而通过外周血浆或血清进行药物 基因检测， 主要检测的是肿瘤细胞坏死后 释放的片段化DNA， 不能真实地反应肿瘤的实际情 况。 [0006]PHLPP磷酸酶家族有PHLPP1和PHLPP2两种亚型， 属于丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶的 PPM超家族。 在最初发现PHLPP作为AKT的蛋白磷酸酶之后， 许多研究证明PHLPP通过抑制多 种致癌信号通路从而抑制结直肠癌的发生和发展。 申请人之前的研究(Cell  Death and  Disease(2 021)12:9 60； https://doi.org/10.1038/s41419 ‑021‑04251‑0)发现： PHLPP下调 是造成结直肠癌化疗耐药的重要原因， 并探明了PHLPP引起结直肠癌耐药的机制， 说明 PHLPP可充当结直肠癌化疗药物敏感性预测的标志物， 但目前临床上并没有可行的试剂盒 和相应的检测手段检测PHLP P mRNA的表达 。 发明内容 [0007]本发明的目的在于提供结直肠癌化疗药物敏感性预测标志物探针及应用， 以解决 上述技术问题。 [0008]本发明目的之一在于提供： 一种结直肠癌化疗药物敏感性预测标志物探针， 包括 用于检测PHLPP1和PHLPP2的PHLPP探针， 用于检测PHLPP1的探针核苷酸序列为SEQ  ID NO.1说　明　书 1/9 页 3 CN 114774545 A 3