ICS 65.020.40 B 60 DB41 河 南 省 地 方 标 准 DB 41/T 1746—2018 紫叶加拿大紫荆组培快繁技术规程 2018 - 12 - 06 发布 河南省市场监督管理局 2019 - 03 - 06 实施 发 布 DB41/T 1746—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由河南省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：河南省农业科学院园艺研究所。 本标准主要起草人：李艳敏、王利民、符真珠、董晓宇、尚泓泉、王慧娟、张和臣、蒋卉、高杰、 张晶、师曼、袁欣、王耀瑭、崔巍。 I DB41/T 1746—2018 紫叶加拿大紫荆组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了紫叶加拿大紫荆组培快繁技术相关的术语及定义、培养基配制、组培快繁程序、炼苗 移栽等内容。 本标准适用于河南省境内紫叶加拿大紫荆组培快繁技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语及定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 紫叶加拿大紫荆 紫叶加拿大紫荆（Cercis Canadensis ‘Forest Pansy’）是加拿大紫荆的一个品种，属豆科紫荆 属，落叶小乔木或灌木；花粉红色，春季先叶开放，花期3～4月；叶片心形，春夏秋三季紫红色，是重 要的彩叶观赏植物。 3.2 植物组培快繁 在无菌条件下，将离体的植物材料接种到培养基上，在适宜的培养条件下，使其形成完整的植株， 达到快速增殖目的的一种繁育方法。 3.3 外植体 用于植物组织培养的离体植物器官、组织及原生质体。 4 培养基配制 按照LY/T 1882的规定执行。 基本培养基采用Woody Plant medium（WPM）和Murashige Skoog medium（MS），成分及用量见附 录A和附录B。 培养基中添加的植物生长调节物质的浓度及配制参见附录C。 5 组培快繁程序 1 DB41/T 1746—2018 5.1 外植体采集与消毒 4月中旬，选择生长健壮、无病虫害植物的半木质去叶新梢作为外植体。 将新梢剪成1 cm～2 cm的带腋芽茎段，按下列程序消毒：自来水下冲洗20 min，之后转移至超净工 作台上，先用75%的乙醇消毒30 s，再用1%的次氯酸钠消毒10 min，无菌水冲洗1遍后，用0.5%的次氯酸 钠消毒10 min～13 min，最后用无菌水冲洗3～4遍。 5.2 培养条件 -2 -1 温度 25℃±2℃，光照强度 25 μ mol·m ·s ，光照时间 12 h/d。 5.3 启动培养 将消毒后的外植体接种至启动培养基：WPM+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L，7 d～10 d外 植体开始萌发，30 d后芽长至2 cm～3 cm时进行增殖培养。 5.4 增殖培养 将启动培养诱导形成的高度为2 cm～3 cm幼芽切下，转接至增殖培养基：WPM+6-BA 1.5 mg/L～2.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L～0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L，增殖周期为30 d。 5.5 生根培养 将高度为4 cm～6 cm的无根幼苗进行两步生根培养：第一步转入1/2MS+IBA 5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+ 蔗糖20 g/L+琼脂6.5 g/L培养基，黑暗培养11 d进行根诱导；第二步转入MS+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L 培养基，在光照下继续培养。 6 炼苗移栽 6.1 炼苗 生根培养30 d后，当幼苗基部长出3～5条长1 cm的新根即可进行炼苗。将生根瓶苗在温室内放置5 d， 然后半开瓶口1 d～2 d，是瓶苗逐步适应外界的环境。温室温度在20 ℃～30 ℃，湿度在60%～90%。 6.2 基质准备 6.2.1 基质配制 移栽基质选用草炭和珍珠岩的混合基质，二者的体积比为3：1. 6.2.2 基质消毒 移栽前用50%多菌灵可湿性粉剂500倍液喷匀基质，充分搅拌后用薄膜密封，堆置7 d后揭开薄膜， 晾24 h即可使用。 6.3 移栽 炼苗结束后，取出培养瓶中的生根组培苗，用清水洗净根系粘附的培养基，栽入6.5 cm×6.5 cm 的营养钵中，摆放在温室苗床上，并立即浇透水。 6.4 移栽后管理 2 DB41/T 1746—2018 6.4.1 温、湿度管理 移栽后立即搭小拱棚密闭保湿，保持小苗的生长温度25 ℃±3 ℃，相对湿度90%以上。移栽10 d～ 15 d后，逐渐揭膜，透气通风，直至完全适应外界的环境。 6.4.2 光照管理 组培苗移栽后，用遮光率为50%～75%的遮阳网遮阴。小苗长出新叶后，及时撤去遮阳网。 6.4.3 施肥 当新叶出现时进行首次施肥，以后每隔2～3周追肥一次，施用N-P2O5-K2O 比例为20-20-20的水溶性 平衡肥，稀释1000～2000倍叶面喷施。 3 DB41/T 1746—2018 AA 附 录 A （规范性附录） WPM 基本培养基母液配制 WPM基本培养基母液配制见表A.1。 表A.1 WPM 基本培养基母液配制 类别 大量元素母液 微量元素母液 铁盐母液 有机物母液 4 配方用量 称取量 配 1L 培养基吸取量 mg/L mg mL 硝酸铵 400 8000 硫酸钾 990 19800 磷酸二氢钾 170 3400 硫酸镁 370 7400 硝酸钙 556 1120 氯化钙 96 1920 硫酸锰 22.5 4500 硫酸锌 8.6 1720 硼酸 6.2 1240 钼酸钠 0.25 50 硫酸铜 0.25 50 硫酸亚铁 27.8 5560 乙二胺四乙酸二钠 37.3 7460 肌醇 100 20000 烟酸 0.5 100 盐酸硫胺素 1.0 200 盐酸吡哆醇 0.5 100 甘氨酸 2.0 400 成分 50 5 5 5 DB41/T 1746—2018 BB 附 录 B （规范性附录） MS 基本培养基母液配制 MS培养基母液的配制见表B.1。 表B.1 MS 培养基母液配制 类别 大量元素母液 微量元素母液 铁盐母液 有机物母液 配方用量 配制母液称取量 mg/L mg/L 硝酸铵 1650 33000 硝酸钾 1900 38000 磷酸二氢钾 170 3400 硫酸镁 370 7400 氯化钙 440 8800 硫酸锰 22.3 4460 硫酸锌 8.6 1720 硼酸 6.2 1240 碘化钾 0.83 166 钼酸钠 0.25 50 氯化钴 0.025 5 硫酸铜 0.025 5 硫酸亚铁 27.8 5560 乙二胺四乙酸二钠 37.3 7460 肌醇 100 20000 烟酸 0.5 100 盐酸硫胺素 0.1 20 盐酸吡哆醇 0.5 100 甘氨酸 2 400 成分 配 1 升培养基 吸取量 mL 50 5 5 5 5 DB41/T 1746—2018 CC 附 录 C （资料性附录） 植物生长调节物质的浓度及配制 植物生长调节物质的浓度及配制参见表 C.1。 表C.1 植物生长调节物质的浓度及配制 浓度 mg/mL 名称 6-苄氨基腺嘌呤 1 （6-benzyladenine，简称 6-BA） 配制方法 称取 0.1 g 药品，先用 0.1 mol/L 的 HCl 溶解，然后用 蒸馏水定容至 100 mL。 称取 0.1 g 药品，先用 0.1 mol/L 的 NaOH 溶解，然后用 α -萘乙酸 （α -naphthaleneacetic acid， 1 蒸馏水定容至 100 mL。 简称 NAA） 吲哚丁酸 （indolebutyric acid，简称 IBA） 1 称取 0.1 g 药品，先用 95%的酒精溶解，然后用蒸馏水定 容至 100 mL。 _________________________________ 6