ICS65.080 CCSB10 团体标准 T/GXAF0010—2023 水溶肥料游离氨基酸含量的测定 分光光度法 Water-solublefertilizer—Determinationoffreeaminoacidcontent— Spectrophotometry 2023-04-10发布 2023-05-01实施 广西肥料协会 发布 全国团体标准信息平台 T/GXAF0010—2023 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 注意本文件某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广西肥料协会提出并归口。 本文件起草单位：广西壮族自治区分析测试研究中心、南宁市凯侨化肥有限公司、广西垂青生物科 技有限公司、广西乐土生物科技有限公司、广西壮族自治区产品质量检验研究院、广西壮族自治区地质 矿产测试研究中心、广西西大检测有限公司。 本文件主要起草人：黄一帆、黄麟钧、韦晓社、陈桂鸾、范晓苏、朱言覃、潘扬昌、贾虎成、李泉、 蓝宝同、周权能、陆章权、卢一叶、李辉宁、陆明光、陈裕新、吉日文、刘辉庭、吕贵升、陈海艳、梁 鑫佳、裴根、李义芬、班雁华、邓艺萍、黄殿贵、陈小莉、邓多桓、滕丽娜、莫达松、陆云、陆银英、 刘永强、陈海燕、唐小丽、许园园、陈艳、谭燚、张曙辉、李妍、马振龙、邓卫利、韦刚、韦丽丽。 全国团体标准信息平台 T/GXAF0010—2023 1水溶肥料游离氨基酸含量的测定 分光光度法 1范围 本文件规定了水溶肥料中游离氨基酸含量测定的分光光度法的试验方法。 本文件适用于液体或固体水溶肥料（乐土富安含氨基酸水溶肥料及由酒精废液、糖蜜液、酸性氨基 酸原粉、碱性氨基酸原粉生产的水溶肥料）中游离氨基酸的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 HG/T2843化肥产品化学分析中常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液 NY/T1975水溶肥料游离氨基酸含量的测定 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 用活性炭吸附蛋白质和消除色素干扰，用EDTA络合金属元素释放氨基酸，氨基酸与茚三酮反应成蓝 色物质，在一定浓度范围内，蓝色溶液的吸光度与氨基酸量成正比关系，用分光光度法测定出总的氨基 酸含量，然后除以矫正系数，得到游离氨基酸含量。 5试剂和材料 除另有说明外，所用的试剂、水和溶液的配制，均应符合HG/T2843的规定。 5.1活性炭。 5.2盐酸溶液（0.06 mol/L）：移取0.25 mL盐酸至50 mL容量瓶中，用纯水定容，摇匀备用。 5.3乙二胺四乙酸二钠溶液（10 g/L）：称取0.5 g乙二酸四乙酸二钠至50 mL容量瓶中，用纯水定容， 摇匀备用。 5.4乙酸-乙酸钠缓冲溶液：pH约5.4。称取13.6 g无水乙酸钠溶于1000  mL水中，再加入1.5 mL 冰乙酸，搅拌均匀备用。 5.5异丙醇溶液（10％）：称取25 g异丙醇到250 mL容量瓶中，用乙酸-乙酸钠缓冲溶液定容，摇匀 备用。 5.6茚三酮溶液（3％）：称取1.5 g茚三酮指示剂至50 mL容量瓶中，用10％异丙醇溶液定容，超声 波震荡至完全溶解，摇匀备用（有效期15天）。 5.7抗坏血酸溶液（0.8 g/L）：称取0.02 g抗坏血酸至25 mL容量瓶中，用水定容，超声波震荡至完 全溶解，摇匀备用（现配现用）。 5.8氨基酸（亮氨酸）标准溶液（240 mg/L）：准确称取含量99％以上的亮氨酸12 mg放入50 mL容量 瓶中，用10％异丙醇溶解定容，超声波溶解后，摇匀备用。 全国团体标准信息平台 T/GXAF0010—2023 26仪器 6.1超声波仪。 6.2恒温水浴锅。 6.3紫外可见分光光度计。 6.4具塞比色管:10 mL。 6.5玻璃比色皿：1 cm。 7分析步骤 7.1试样的制备 固体样品经多次缩分后，取出约100 g，将其迅速研磨至全部通过0.50 mm孔径筛（如样品潮湿，可 通过1.00 mm筛子），混合均匀，置于洁净、干燥容器中。液体样品经多次摇动后，迅速取出约200mL， 置于洁净、干燥的容器中。 7.2试样溶液的制备 称取试样1 g～5 g（精确到0.001 g），置于250 mL容量瓶中，用水充分溶解后定容到刻度，摇匀 后干过滤，弃去20 mL初滤液。取约30 mL滤液于小烧杯中，加入一勺（约2 g）活性炭（5.1）搅拌2min， 静置5 min后干过滤，再用0.45 μm的微孔滤膜过滤滤液。准确移取0.50mL滤液于50mL容量瓶中，加 入1.0 mLEDTA-Na溶液（5.3）和1.0mL盐酸溶液（5.2），用乙酸-乙酸钠缓冲(5.4)溶液定容，摇匀 后干过滤，滤液备用待测。 7.3标准曲线的绘制 7.3.1空白溶液的制备：用移液管依次吸取2.00 mL蒸馏水、1.00 mL茚三酮溶液(5.6)、0.50 mL抗 坏血酸溶液(5.7)、1.50 mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液(5.4)于具塞比色管中，在100 ℃的沸水中加热15  min，取出冷却至室温，摇匀。 7.3.2标准曲线的绘制：用移液管吸取1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL氨基酸标准 溶液(5.8)分别置于5个50 mL容量瓶中，用10％异丙醇溶液(5.5)定容，摇匀。分别用移液管依次吸 取2.00 mL上述溶液、1.00 mL茚三酮溶液(5.6)、0.50 mL抗坏血酸溶液(5.7)、1.50 mL乙酸-乙酸钠 缓冲溶液(5.4)于具塞比色管中，在100 ℃的沸水中加热15 min，取出冷却至室温，摇匀。以空白溶液 为参比，于波长573 nm处测定各吸光度。以氨基酸的质量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 7.4样品的测定 分别用移液管依次吸取2.00mL试样溶液（7.2）、1.00mL茚三酮溶液(5.6)、0.50mL抗坏血酸 溶液(5.7)、1.50mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液(5.4)于具塞比色管中，在100℃的沸水中加热15min，取 出冷却至室温，摇匀。以空白溶液为参比，于波长573 nm处测定样品溶液吸光度，在标准曲线上查得 相应的游离氨基酸质量。 7.5平行试验 按7.1～7.3步骤对同一试样进行平行实验测定。 7.6空白试验 除不称取试样外，按7.1～7.3步骤进行空白操作。 全国团体标准信息平台 T/GXAF0010—2023 38分析结果的表述 试样中游离氨基酸含量（ω）以其质量分数（％）表示，按式（1）计算： 式中： ω——游离氨基酸的质量分数(％)； m1——测得试样吸光度在标准曲线上查得对应的游离氨基酸质量(μg)； V1——样品定容总体积，单位为毫升（mL）； V2——分取滤液体积，单位为毫升（mL）； m——样品的质量，单位为克（g）； f——不同原料或产品的矫正系数，（乐土富安含氨基酸水溶肥：f=1.5；酒精废液：f=1.4；糖蜜液： f=1.2；酸性氨基酸原粉：f=2.5；碱性氨基酸原粉：f=1.0）。 取平行测定的算术平均值为测定结果，保留到小数点后两位。 9允许差 允许差符合NY/T1975的规定。 100 ωfm10m 2v1v6 1  …………………………………（1） 全国团体标准信息平台