(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210891539.5 (22)申请日 2022.07.27 (71)申请人 上海奥浦迈生物科技股份有限公司 地址 201321 上海市浦东 新区紫萍路908弄 28号 (72)发明人 邵熙　杜青青　肖志华　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 陆惠中 (51)Int.Cl. G01N 30/60(2006.01) G01N 30/02(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一 种应 用于 培 养 基 上 清蛋白 定 量的 nanoHPLC-Titer系统 (57)摘要 本发明提供了一种应用于培养基上清蛋白 定量的nanoHPLC ‑Titer系统。 该系统包 括nano亲 和色谱柱、 nanoHPLC色谱泵、 自动进样系 统和检 测器。 所述的nano亲和色谱柱的制备方法为： （1） 取干净的色谱柱管， 管末端使用筛板及两通封 堵， 将亲和色谱填料装填至色谱柱管中； （2） 装填 完成后， 在色谱柱的入口端封 上筛板及两通； （3） 在色谱柱的正常使用压力下， 使用流动相冲洗装 好的色谱柱； （4） 色谱柱冲洗完成后， 将两端接口 使用堵头密封待用。 本发明开发了一套新型的 nanoHPLC ‑Titer系统， 能够实现低浓度小体积上 清样品的表达量测定， 在蛋白定量分析领域具有 广泛的应用前 景。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 115356425 A 2022.11.18 CN 115356425 A 1.一种新型nanoHPLC ‑Titer系统， 包括nano亲和色谱柱、 nanoHPLC色谱泵、 自动 进样系 统和检测器， 其特 征在于， 所述的nan o亲和色谱柱的制备 方法为： （1） 取干净的色谱柱管， 管末端使用筛板及两通封堵， 将亲和色谱填料装填至色谱柱管 中； （2） 装填完成后， 在色谱柱的入口端封上筛 板及两通； （3） 在色谱柱的正常使用压力下， 使用流动相冲洗装好的色谱柱； （4） 色谱柱冲洗 完成后， 将两端接口使用堵头密封待用。 2.根据权利要求1所述的新型nanoHPLC ‑Titer系统， 其特征在于， 步骤 （1） 所述色谱柱 管的材质为熔融石英毛细管， 聚醚 醚酮管或不锈钢管。 3.根据权利要求1所述的新型nanoHPLC ‑Titer系统， 其特征在于， 步骤 （1） 所述色谱柱 管的内径小于等于 500 μm。 4.根据权利要求1所述的新型nanoHPLC ‑Titer系统， 其特征在于， 步骤 （1） 所述色谱柱 管的管长为1 ‑25 cm。 5.根据权利要求1所述的新型nanoHPLC ‑Titer系统， 其特征在于， 步骤 （1） 所述的填料 为Protei n A填料， Protei n G填料或Capto l L填料。 6.根据权利要求1所述的新型nanoHPLC ‑Titer系统， 其特征在于， 步骤 （3） 所述的流动 相选自甲醇、 乙腈、 乙醇或异丙醇这四种有机相； 或者前述有机相与水的混合物。 7.根据权利要求1所述的新型nanoHPLC ‑Titer系统， 其特征在于， 自动进样系统至nano 亲和色谱柱之间的死体积小于2  μL， nano亲和色谱柱至检测器之间的死体积小于1  μL。 8.根据权利要求1 ‑7任一项所述的新型n anoHPLC‑Titer系统用于培养基上清蛋白定量 的用途。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115356425 A 2一种应用于培养基上清蛋白定量的n anoHPLC‑Titer系统 技术领域 [0001]本发明涉及生化检测领域， 尤其涉及一种应用于培养基上清蛋白定量的 nanoHPLC‑Titer系统。 背景技术 [0002]高效液相色谱法 （英语： high  performance  liquid chromatography， 缩写   HPLC）， 又译高效液相层析法， 以前曾指高压液相层析法 （high  pressure  liquid  chromatograph y） ， 是一种色谱分析技术， 用来分离混合物， 以确认并量化各个成分的比例。 它依赖泵加压样品以令其通过填充有固定相的压力柱， 导致样品的各个成分因与固定相的 相互作用力不同而分离 。 高效液相色谱法常用于生物化学和分析化学。 [0003]现有的HPLC ‑Titer系统， 虽然能准确测定细胞培养液上清中的蛋白表达量， 但是 由于使用的是常规色谱， 因此需要的样品体积一般为毫升级别， 且定量限约0.5  mg/mL。 在 细胞株筛选阶段， 一般会 先进行96孔板的铺板。 由于96孔板中的培养基一般只有约100  μL， 所以在96孔板阶段， 一般不能做基于HPLC ‑titer的表达量分析。 在一些项目中， 会 出现表达 量低于0.1 mg/mL的样品， 使用常规的HPLC ‑titer系统不能对这些样品准确定量。 [0004]综上， 目前还 没有一种行之有效的仪器分析手段， 能够使用约10  μL体积的细胞培 养液上清， 对上清中的蛋白质进行定量， 且定量限低于 0.1 mg/mL。 发明内容 [0005]现有技术中的HPLC ‑Titer分析系统需要的样品体积大， 定量限高， 限制了其在定 量分析中的作用， 针对上述缺陷， 本发明开发了一种应用于培养基上清蛋白定量的 nanoHPLC‑Titer系统， 技 术方案如下： 本发明的第一个方面公开了一种新型nanoHPLC ‑Titer系统， 包括nano亲和色谱 柱、 nanoHPLC色谱泵、 自动进样系统和检测器， 其特征在于， 所述的nano亲和色谱柱的制备 方法为： （1） 取干净的色谱柱管， 管末端使用筛板及两通封住， 将亲和色谱填料装填至色谱 柱管中； （2） 装填完成后， 在色谱柱的入口端封上筛 板及两通； （3） 在色谱柱的正常使用压力下， 使用流动相冲洗装好的色谱柱； （4） 色谱柱冲洗 完成后， 将两端接口使用堵头密封待用。 [0006]进一步地， 步骤 （1） 所述色谱柱管的材质为熔融石英毛细管， 聚醚醚酮管或不锈钢 管。 进一步地， 步骤 （1） 所述色谱柱管的内径小于等于 500 μm。 [0007]进一步地， 步骤 （1） 所述色谱柱管的管长为1 ‑25 cm。 [0008]进一步地， 步骤 （1） 所述的填料为Protein  A填料， Protein  G填料或Captol  L填 料。 [0009]进一步地， 步骤 （3） 所述的流动相选自甲醇、 乙腈、 乙醇或异丙 醇等有机相； 或者前说　明　书 1/3 页 3 CN 115356425 A 3