(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210852965.8 (22)申请日 2022.07.20 (71)申请人 北京农学院 地址 102206 北京市昌平区回龙观镇北农 路7号 (72)发明人 姚允聪　秦晓晓　邢云峰　张杰　 孙悦　赵静雅　 (74)专利代理 机构 北京邦创至诚知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11717 专利代理师 张宇锋 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) B01D 11/04(2006.01)B01J 19/10(2006.01) (54)发明名称 一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄 酮物质的方法 (57)摘要 本发明提供了一种快速分离鉴定苹果属植 物叶片中类黄酮物质的方法， 包括如下步骤： 利 用超声波萃取技术提取不同苹果属植物 叶片中 的类黄酮物质； 通过超高液相色谱飞行时间质谱 联用技术检测类黄酮组分； 建立苹果属植物类黄 酮组分的标准图谱； 对需鉴定的苹果属植物叶片 进行前两步的操作， 之后与第三步骤中得到的标 准图谱进行比对， 进而完成分离鉴定。 本发明可 以有效的提取和检测苹果属植物中复杂的类黄 酮物质， 减少同分异构体离子干扰的影响。 本申 请提取检测方法可靠， 快速高效， 图谱清晰， 重复 性好， 结果可靠， 可检测低浓度样本， 高通量复杂 样本分析， 为苹果属植物代谢 组学研究提供技术 范畴， 是一套适用于苹果属植物类黄酮物质分析 的检测技 术。 权利要求书1页 说明书10页 附图2页 CN 115184502 A 2022.10.14 CN 115184502 A 1.一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法， 其特征在于， 包括如下步 骤： S1： 利用超声 波萃取技术提取不同苹果属植物叶片中的类黄酮物质； S2： 通过超高液相色谱飞行时间质谱联用技 术检测类黄酮组分； S3： 建立苹果属植物类黄酮组分的图谱； S4： 对需鉴定的苹果属植物叶片进行步骤S1和步骤S2的操作， 之后与步骤S3中得到的 所述图谱进行比对， 进 而完成分离鉴定 。 2.根据权利要求1所述的快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法， 其特征 在于， 所述超声波萃取技术中样品量与提取液的比例为： 1g样品使用4mL提取液； 所述提取 液的体积配比为甲醇： 甲酸： 水＝80:1:19； 超声 波萃取水浴温度为 45℃， 时间为6 0min。 3.根据权利要求1所述的快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法， 其特征 在于， 步骤S2中检测类黄酮 组分时样品温度为15℃； 柱温为40℃； 流速为0.5  mL/min； 进样 量为0.4 μL。 4.根据权利要求1所述的快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法， 其特征 在于， 步骤S2中流动相A采用体积比为0.1％的甲酸水； 流动相B采用色谱纯乙腈： 0  min  10％B， 4.5  min 19％B， 9.5  min 32％B， 10.5  min 35％B， 11.5 min 65％B， 14 min 95％B。 5.根据权利要求1所述的快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法， 其特征 在于， 步骤S2中分析柱平 衡时间为1  min； 平衡： 14  min 95％B； 15  min， 10％B； 检测波长为： 200 nm‑400 nm。 6.根据权利要求1所述的快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法， 其特征 在于， 步骤S2的检测条件为： 离子源模式为电喷雾离子源； 毛细管电压为0.45  Kv， 数据采集 质量范围为100 ‑1200 m/z， 扫描时间为0.2  s， 采用高纯的氮气作为辅助喷雾电离与脱溶剂 气体， 氮气干燥温度： 500℃， 氮气流速： 800  L/h， 雾化气压： 241.3  kPa； 毛细管电压： 2  kV， 毛细管出口电压： 40  V； 八级射频电压振幅： 150  Vpp； skim  1电压： 37.5V， skim  2电压： 6.0   V； cap exit offset,74.3  V。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115184502 A 2一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 植物天然代谢产物分析技术领域， 尤其是涉及一种快速分离鉴定苹果 属植物叶片中类黄酮物质的方法。 背景技术 [0002]苹果属(Malus  Mill.)植物是蔷薇科(Rosaceae)中经济价值比较高的一类植物， 苹果属植物中具有丰富的类黄酮物质， 这些类黄酮物质有着很好的生物活性， 如抗氧化、 抗 炎和抗癌等功效。 到目前为止， 快速分离准确 鉴定苹果属 植物叶片观赏海棠类黄酮物质生 物活性成分的研究较少。 本专利选取不同地区的原产中 国苹果属植物观赏海棠作为 实验材 料， 利用UPLC ‑Q‑TOF‑MS技术， 发 明了一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方 法， 同时建立了苹果属 植物的标准图谱。 该研究方法不仅为苹果属 植物资源利用提供有力 的数据支持， 而且还能为苹果属植物在食品、 医药和保健品开发方面的研究提供理论依据 和实践价值。 [0003]公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在加深对本发明的总体背景技术的理解， 而 不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域 技术人员所公知的现有技 术。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法， 以解决现有技 术中存在的问题。 [0005]为了实现上述目的， 本发明采用以下技 术方案： [0006]本发明提供一种快速分离鉴定苹果属植物叶片中类黄酮物质的方法， 包括如下步 骤： [0007]S1： 利用超声 波萃取技术提取不同苹果属植物叶片中的类黄酮物质； [0008]S2： 通过超高液相色谱飞行时间质谱联用技 术检测类黄酮组分； [0009]S3： 建立苹果属植物类黄酮组分的标准图谱； [0010]S4： 对需鉴定的苹果属植物叶片进行步骤S1和步骤S2的操作， 之后与步骤S3中得 到的所述标准图谱进行比对， 进 而完成分离鉴定 。 [0011]优选地， 所述超声波萃取技术中样品量与提取液的比例为： 1g样品使用4mL提取 液； 所述提取液的体积配比为甲醇： 甲酸： 水＝80:1:19； 超声波萃取水浴温度为45℃， 时间 为60min。 [0012]优选地， 步骤S2中检测类黄酮组分时样品温度为15℃； 柱温为40℃； 流速为0.5mL/ min； 进样量 为0.4 μL。 [0013]优选地， 步骤S2中流动相A采用体积比为0.1％的甲酸水； 流动相B采用色谱纯乙 腈： 0min 10％B， 4.5min  19％B， 9.5min  32％B， 10.5min35％B， 11.5min  65％B， 14 min 95％ B。 [0014]优选地， 步骤S2中分析柱平衡时间为1min； 平衡： 14min  95％B； 15 min， 10％B； 检测说　明　书 1/10 页 3 CN 115184502 A 3