ICS67.050 CCSX04 团体标准 T/SATA040—2023 食品中胆碱和左旋肉碱的测定 液相色谱-串联质谱法 DeterminationofcholineandL-carnitineinfoods- Liquidchromatography-tandemmassspectrometry 2023-03-21发布 2023-04-21实施 深圳市分析测试协会  发布 全国团体标准信息平台 T/SATA040—2023 I目次 前 言............................................................................II 1范围.................................................................................1 2规范性引用文件.......................................................................1 3术语和定义...........................................................................1 4原理.................................................................................1 5试剂与材料...........................................................................1 试剂.............................................................................1 试剂配制.........................................................................1 标准品...........................................................................1 标准溶液配制.....................................................................1 6仪器和设备...........................................................................2 7分析步骤.............................................................................2 样品前处理.......................................................................2 仪器参考条件.....................................................................2 标准曲线的制作...................................................................3 定性和定量.......................................................................3 试样溶液的测定...................................................................3 8分析结果的表述.......................................................................4 9精密度...............................................................................4 10其他................................................................................4 附录A（资料性）胆碱和左旋肉碱标准溶液的液相色谱-串联质谱图.....................5 全国团体标准信息平台 T/SATA040—2023 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由深圳市分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位：深圳市计量质量检测研究院、深圳市分析测试协会。 本文件主要起草人：陈佳平、蓝雄、王奇、刘永固、董珊、苏佳婷、肖伟敏、张协光、杨国武、杨 杰、陈思羽、汪璇、王一晨。 全国团体标准信息平台 T/SATA040—2023 1食品中胆碱和左旋肉碱的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了胆碱和左旋肉碱的液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于食品中胆碱和左旋肉碱的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样经酸水解后，得到游离的胆碱和左旋肉碱，用液相色谱-串联质谱测定，标准曲线内标法定量。 5试剂与材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 试剂 5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。 5.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。 5.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。 5.1.4浓盐酸（HCl）：密度为1.19g/mL。 试剂配制 5.2.10.1%甲酸水溶液：准确吸取1mL甲酸（5.1.3）于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混 匀。 标准品 5.3.1胆碱标准品：酒石酸氢胆碱（C9H19NO7，CAS：87-67-2）。 5.3.2左旋肉碱标准品：L-左旋肉碱（C7H15NO3，CAS：541-15-1）。 5.3.3氯化胆碱-三甲基-D9内标：氯化胆碱-三甲基-D9（C5H5ClD9NO，CAS：61037-86-3）。 5.3.4左旋肉碱-D3内标：左旋肉碱-D3（C7H13D3ClNO3，CAS：350818-62-1）。 标准溶液配制 5.4.1标准储备液：准确称0.0418g（精确至0.0001g）酒石酸氢胆碱和0.0200g（精确至0.0001g） L-左旋肉碱于100mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）溶解，定容至刻度，配制成200μg/mL标准储备液。 全国团体标准信息平台 T/SATA040—2023 24℃冰箱保存，保存期六个月。 分别称取标准物质左旋肉碱-D3和氯化胆碱-三甲基-D9各0.0200g于100mL容量瓶中，用甲醇 （5.1.1）溶解，定容至刻度，配制成200μg/mL的内标储备液。4℃冰箱保存，保存期六个月。 5.4.2标准中间液：将储备液用甲醇（5.1.1）稀释，得到浓度均为2.00μg/mL胆碱、L-左旋肉碱、 左旋肉碱-D3和氯化胆碱-三甲基-D9中间液。4℃冰箱保存，保存期一周。 5.4.3标准工作液：将中间液用甲醇（5.1.1）稀释，得到左旋肉碱-D3和氯化胆碱-三甲基-D9内标浓 度均为40.0ng/mL，胆碱和L-左旋肉碱浓度均为10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、 200ng/mL、400ng/mL的标准系列工作液。临用前配制。 6仪器和设备 液相色谱-串联质谱仪：配置电喷雾电离源。 分析天平：感量0.001g和感量0.000lg。 漩涡混合器。 恒温水浴锅。 离心机：转速不低于6500r/min。 7分析步骤 样品前处理 称取2g（精确至0.001g）样品，用20mL40℃温水溶解，转移至50mL容量瓶中，定容。移 取定容后的溶液5mL于100mL比色管，加入0.5mL浓盐酸（5.1.4），涡旋混匀。放置于70℃水浴 锅中水解3h，将水解液转移至100mL容量瓶中定容，过滤。准确吸取滤液1mL至25mL容量瓶中， 加入内标标准中间液0.5mL，用水定容。涡旋摇匀后，过滤上机。 仪器参考条件 7.2.1液相条件 a)色谱柱：C18柱(柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.9μm)，或相当者； b)流动相：乙腈和0.1%甲酸水溶液； c)流速：0.3mL/min； d)柱温：35℃±0.5℃； e)样量：5µL； f)洗脱梯度见表1。 表1超高效液相色谱洗脱梯度参考条件 时间/min 0.1%甲酸水溶液（%） 乙腈（%） 0 80 20 0.5 80 20 4.5 5 95 7 80 20 7.2.2质谱条件 a)离子源：电喷雾离子源； b)离子模式：正离子； c)扫描方式：选择反应监测（SRM）； 全国团体标准信息平台 T/SATA040—2023 3d)喷雾电压：3500V； e)蒸发温度：360℃； f)鞘气压力：42arb； g)反吹气压力：0arb； h)辅助气压力：10arb； i)离子传输毛细管温度：300℃； j)主要质谱参考条件见表2。 表2胆碱和左旋肉碱的质谱参考条件 监测化合物保留时间/