ICS 65.020.20 CCS YNYY B31 团体 标准 T/YNYY010—2023 猕猴桃组培苗生产技术规程 Technical regulations for the production of kiwifruit tissue culture nurseries 2023-07-10发布 2023-07-11实施 云南省园艺学会 发布 全国团体标准信息平台 T/YNYY010 —2023 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则第 1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南省农业科学院园艺作物研究所提出 。 本文件由 云南省园艺学会 归口。 本文件起草单位： 云南省农业科学院园艺作物研究所、云南大学、 云南农业职业技术学院 。 本文件主要起草人： 黄文静、杨光柱、刘丹丹、马钧、赵俊伟、丁仁展、苏俊、 郑丽萍、李坤明、 陈瑶、梁艳萍、陈霞 。 全国团体标准信息平台 T/YNYY010 —2023 2 猕猴桃组培苗生产技术规程 1 范围 本文件规定了猕猴桃（ Actinidia chinensis. ）组培苗种苗生产的术语和定义、培养基制备、诱导 培养、增殖培养、生根培养、炼苗的技术要求。 本文件适用于猕猴桃组培苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 19174-2010 猕猴桃苗木 GB/T 6001 -1985 育苗技术规程 LY/T 1000 -2013 容器育苗技术 DB50/T 948 -2019 猕猴桃组培种苗生产技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 组培苗tissue culture nurseries 根据植物细胞全能性理论，通过植物组织培养技术，利用外植体，在无菌和适宜的人工条件下培育 的完整植株 3.2 外植体explant 指用于植物组织培养的接种材料，包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质体等。 3.3 接种 inoculate 外植体的接种是把经过表面灭菌后的植物材料切碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养基 上的全部操作过程。 3.4 增殖培养 proliferation culture 将诱导产生的芽、愈伤组织等培养物重新切割，接种到增殖培养基中进一步扩大培养的过程 4 培养基制备 4.1 母液的配制 MS培养基母液配制表见附录 A。 4.2 培养基配方 基本培养基采用 MS培养基，具体的外植体诱导、增殖、生根培养基配方表见附录 B 4.3 培养基配制、灭菌、保存 全国团体标准信息平台 T/YNYY010 —2023 3 根据不同培养阶段配方和培养基配制量，按比例吸取母液配制培养基溶液，加入各培养阶段 6-BA、 NAA浓度，并加入 0.7%琼脂和3%蔗糖，加水定容后充分搅拌溶解。用 1.0mol/L盐酸或1.0mol/L氢氧化钠 溶液调整 pH值至5.8～6.0。 分装好后， 放入灭菌锅， 灭菌气压 0.11MPa， 温度121℃， 灭菌20min～25min。 灭菌完成冷却后放置于干净、避光的室内进行保存，室温 25℃以下保存应在 7d内使用完。 4.4 接种器具准备 接种前用 75%酒精将超净工作台擦拭干净后启动并开启紫外灯消毒 30min，关闭紫外 灯后10min可进行接 种工作。接种刀、剪刀、枪状镊、接种盘、烧杯等接种工具可提前高压灭菌备用。接种过程中可置于超 净工作台上电热消毒灭菌器灭菌，灭菌后放于接种架上冷却后使用。 5 诱导培养阶段 5.1 外植体采集及处理 5.1.1 外植体采集 采集母株为生长健壮、 无病虫害的猕猴桃植株。 春季天气晴朗时采集一年生枝条， 修剪成 20cm左右枝段， 湿毛巾包裹带回实验室备用。 5.1.2 外植体处理 外植体取回后， 修剪成带 2～3个腋芽的茎段， 自来水冲洗 1h， 在超净工作台用 75%乙醇浸泡 45s不时摇动， 10%次氯酸钠浸泡 10min，期间不时的摇动，无菌水冲洗 4～5次，置于无菌滤纸上晾干待用。 5.2 诱导培养 消毒好的外植体，带腋芽茎段每含 1～2个腋芽切成 1段，垂直插入诱导培养基，每瓶接种 3～4 个茎段，均匀分布，在瓶身上标明品种名称、接种日期、接种人的等信息，接种完毕后，置于光照培养 室中培养。 5.3 培养条件 光照培养室条件为室温 25±2℃，12h/d光照，光照强度 2500 lx。 5.4增殖培养 将诱导出超过 1cm的腋芽从茎段上切下，接种于增殖培养基中，每瓶接种 3～4个茎段，均匀分布， 生长20～25d获得的不定芽，将其切下转入新配制的增殖培养基中，扩大不定芽数量。此后，每隔 25d 左右继代一次。 5.5生根培养 将生长状态良好的无菌苗切成含 2～3片叶片的小段， 接种于于含 NAA的1/2MS生根培养基中， 每瓶接种 3-4 个幼苗进行生根培养。 5.6炼苗 当不定芽生长长度达 3cm以上，根系生长状态良好时，可将组培瓶放于温度 20℃～30℃炼苗室或温室中 3d后，打开瓶盖加入少量清水进行炼苗 2d，期间应避免强光 直射或高温灼伤幼苗，遮光率控制在 65%～ 70%。 5.6 移栽及基质 在育苗棚内，用清水洗去幼苗根系上残留的培养基，根部放入稀释 2000倍多菌灵、 稀释2000倍百菌清等 杀菌剂中 1～2min，取出后排列整齐，适当浇水避免干燥。 全国团体标准信息平台 T/YNYY010 —2023 4 泥炭土和珍珠岩（ V:V=7:3）混合基质作为移栽基质，移栽前 1～2d用500倍～800倍50%多菌灵溶液 浇透基质消毒。 采用48孔穴盘（ 540mm280mm5.5mm），基质装盘后洒透水，每穴插孔，清洗后的幼苗插入穴盘， 根部完全掩埋， 放置于苗床， 50%遮光培养， 保持土壤相对含水量 40%～70%， 育苗棚内温度不宜超过 30℃～ 32℃，组培苗移栽后每天喷洒水 3～4次。 5.7 苗期管理 移栽后7天，可用 0.5%复合肥（ N:P:K=1:1:1 ）喷雾，每隔 10d喷施1次，连续喷施 3～4次，期间配合使用 3～4次杀菌剂防治根腐病、立枯病、炭疽病、溃疡病，使用 3～4次杀虫剂防治螨类、鳞翅目类害虫，幼 苗生长旺盛，培养 50～60d即可出圃。 5.8 出圃苗规格 育苗圃中的幼苗，苗高 12cm以上，侧根数量 ≥5条，侧根长度 ≥20cm，可出圃。 6 生产档案管理 按照GB/T 6001-1985中第13章执行。 全国团体标准信息平台 T/YNYY010 —2023 5 附录 A （规范性） MS培养基成分及母液配制表 表A.1 MS培养基成分及母液配制表 母液及倍数 试剂 配方规定量 mg/L 配置 1L母液需求量 g 大量元素 20倍 NH 4NO 3 1650 33 KNO 3 1900 38 MgSO 4· 7H 2O 170 7.4 KH 2PO 4 370 3.4 钙元素 20倍倍数的表示 CaCL 2· 6H 20 440 8.8 微量元素 200倍 KI 0.83 0.16 H3BO 3 6.2 1.24 MnSO 4·H2O 22.3 3.38 ZnSO 4· 7H 2O 8.6 1.72 NaMoO 4· 2H 2O 0.25 5010-3 CuSO 4· 5H 2O 0.025 5 10-3 CoCl· 6H 2O 0.025 5 10-3 铁元素 200倍 FeSO 4· 7H 2O 37.3 5.56 Na2EDTA· 2H 2O 27.8 7.46 有机物 200倍 肌醇 100 20 烟酸 0.5 0.1 盐酸吡哆醇 0.5 0.1 烟酸硫胺素 0.5 0.2 甘氨酸 2 0.4 全国团体标准信息平台 T/YNYY010 —2023 6 附录 B （规范性） 13个猕猴桃组培不同阶段培养基及激素浓度情况表 表B.1 13个猕猴桃组培不同阶段培养基及激素浓度情况表 编 号 品名 诱导培养 阶段 mg/L 扩繁培养 阶段 mg/L 扩繁 系数 生根培养 阶段 mg/L 生根成 活率 % 1 翠玉 MS+6BA1.0+NAA0.5 MS+6BA2.0+NAA0.3 6.7 1/2MS+NAA0.2 88.4 2 贵长 MS+6BA1.5+NAA0.3 MS+6BA2.5+NAA0.3 5.8 1/2MS+NAA0.2