ICS 65.020 CCS B 16 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 3148—2023 油菜籽携带 黑胫病菌分子检测技术规程 Technical code of practice for molecular detection of leptosphaeria spp. from contaminated oilseed rape 2023-08-25发布 2023-09-25实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 3148 —2023 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（ SAM/TC 20 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、特泥河农牧场有限公司、巴彦淖尔市乌拉特中旗现 代农牧事业发展中心、呼和浩特市园林植保站。 本文件主要起草人：宋培玲、李子钦、燕孟娇、杨永青、贾晓清、皇甫海燕、霍宏丽、赵丽丽、郭 晨、皇甫九茹、张英、袁喜丽、斯琴、高树娟。 DB15/T 3148 —2023 1 油菜籽携带黑胫病菌分子检测技术规程 1 范围 本文件规定了油菜籽携带黑胫病菌的分子检测方法，主要包括样品 DNA提取、PCR扩增检测、琼脂 糖凝胶电泳、结果判定。 本文件适用于油菜籽携带黑胫病菌的检测。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 油菜黑胫病 phoma stem canker of rapeseed 由小球腔菌属真菌 Leptosphaeria maculans 或Leptosphaeria biglobosa 侵染引起的油菜病害，危 害叶片和茎秆。 L.biglobosa 致病性较弱，侵染油菜叶片和茎秆后，形成黑色病斑，病斑上散有零星的小黑点（分 生孢子器） ，叶片上病斑的周围可见有黄色晕圈。 L. maculans 致病性较强， 侵染油菜叶片后， 形成大的、 黑褐色病斑， 上面分布有较多的小黑点 （分 生孢子器） ，后期在茎基部也能形成病斑，从而造成茎基部的腐烂。 4 主要仪器设备和试剂 主要仪器设备 高压灭菌锅、超纯水系统、制冰机、水浴锅、电泳仪、 PCR仪、凝胶成像系统、超低温冰箱、常规 冰箱、离心机、涡旋振荡器、移液器 。 主要试剂 4.2.1 DNA提取试剂： QIAGEN’s mini kit 提取试剂盒， CTAB 提取液（ 1.4 mol/L NaCl ， 100 mmol/L Tris-HCl pH 8.0 ，20 mmol/L EDTA pH 8.0 ，2% CTAB），氯仿，异戊醇，醋酸钠，异丙醇，乙醇。 4.2.2 PCR检测试剂： 10×PCR 缓冲液， Taq酶，dNTP，dd H 2O。 4.2.3 凝胶电泳试剂：琼脂糖， TAE，loading buffer ，核酸染料。 5 样品DNA提取