ICS 07.080 CCS B 44 35 福建省地方标准 DB35/T 2132 —2023 实验用秀丽隐杆线虫 饲育技术 Experimental Caenorhabditis elegans—Rearing technique 2023 - 10 - 25 发布 2024 - 01 - 25 实施 福建省市场监督管理局 发布 DB35/T 2132 —2023 I 目次 前言 ............................................................ ..................... II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................... ................ 1 4 人员 ............................................................................... 1 5 环境与设施 ......................................................... ................ 2 6 引种与保种 ......................................................... ................ 2 7 繁育 ............................................................................... 3 8 饲养 ............................................................................... 4 9 消毒与感染防控 ..................................................................... 6 10 废弃物处理 ......................................................... ............... 6 11 记录与档案 ......................................................... ............... 6 附录 A（资料性） 仪器设备及耗材 ...................................................... 7 附录 B（资料性） 培养基及试剂 ........................................................ 9 附录 C（资料性） 雄虫及雌雄同体虫的形态结构图........................................ 11 附录 D（资料性） 线虫的生长周期 ..................................................... 1 3 附录 E（资料性） O P 5 0 的培养 ........................................................ 14 附录 F（资料性） 线虫易感染的微生物和寄生虫 .......................................... 15 参考文献 .......................................................... ................... 16 DB35/T 2132 —2023 II 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由福建上源生物科学技术有限公司提出。 本文件由福建省科技厅归口。 本文件起草单位：福建上源生物科学技术有限公司、福建农林大学、福建师范大学。 本文件主要起草人：赵培、张壬辉、陈岚彬、张积森、林晨韬、郑惠、卞文印、蔡栋灵。 DB35/T 2132 —2023 1 实验用秀丽隐杆线虫 饲育技术 1 范围 本文件规定了实验用秀丽隐杆线虫（以下简称“线虫”）饲育过程中人员、环境与设施、引种与保 种、繁育、饲养、消毒与感染防控、废弃物处理、记录与档案等技术要求。 本文件适用于实验用秀丽隐杆线虫的饲育。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682— 2008 分析实验室用水规格和实验方法 GB 14925—2010 实验动物 环境及设施 GB/T 34791—2 017 实验动物 质量控制要求 JG/T 292 洁净工作台 SN/T 4835 实验室生物废弃物管理要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 秀丽隐杆线虫 Caenorhabditis elegans 秀丽隐杆线虫属于线形动物门 （Nemathelminthes） ，线虫纲（Nematoda） ，小杆线虫目 （Rhabditida） ， 广杆线虫属（ Caenorhabditis ），食细菌的线形动物，对人体无毒无害，安全的实验动物。 大肠埃希氏菌 OP50 Escherichia coli OP50（E. coli OP50） 尿嘧啶缺陷型大肠杆菌。 幼虫期线虫 larval phase Caenorhabditis elegans 未性成熟的线虫，分为一龄（L1）、二龄（L2）、三龄（L3）、四龄（L4）四个时期。 耐受期线虫 dauer phase Caenorhabditis elegans L2时期线虫在逆境条件下发育而成的滞育线虫。 4 人员 一般要求 DB35/T 2132 —2023 2 按照GB/T 34791—2017中规定的人员技术指标执行。 管理人员 包括设施负责人、技术负责人和质量负责人，应经过专业培训，掌握线虫的生理、生态习性和专业 知识，满足岗位技能要求。 饲育人员 身体健康，并接受过专业培训，熟练掌握操作技能。 5 环境与设施 设施 设施的外部环境、工艺布局及其暖通空调、给排水、供电照明、通讯监控、消防等按GB 14925—2010 中普通环境的要求执行。 设备及试剂耗材 饲育所需的仪器设备及耗材见附录A。 区域布局 5.3.1 布局 各区域之间应规定合理的人员流动路线，辅助功能区和饲育区应分开。 5.3.2 辅助功能区 包括称量区、灭菌区、制板区、食物制备区、废弃物品处理区等。 5.3.3 饲育区 用于线虫饲养繁育的区域。 环境 5.4.1 技术指标 饲育区环境指标按照GB 14925—2010的相关规定执行。 5.4.2 监测方法 设施环境指标监测方法按照GB 14925—2010的相关规定执行。 6 引种与保种 引种 满足以下要求： DB35/T 2132 —2023 3 —— 应从正规种质资源库进行引种，以获取遗传背景明确的线虫种质资源； —— 引种过程应建立包括种名、来源、引种日期等信息的档案； —— 境外引种时应按国家相关规定执行。 保种 6.2.1 线虫的选取 应选取L1幼虫期线虫或耐受期线虫进行长期保种。 6.2.2 保种条件 温度低于﹣80 ℃。 6.2.3 保种方法 线虫的保种应采用超低温冻存技术，应满足以下要求： —— 冻存液选用 S 缓冲液1 和含有 30％甘油的 S 缓冲液 2，详细配方见附录 B； —— 冻存器材选用冻存管、梯度降温盒； —— 冻存液中收集的线虫密度宜为每 1 ml 冻存液中包含 600～1 000只线虫，每支冻存管中分装 1 mL； —— 冻存管在﹣80 ℃冰箱的临时保存区梯度降温至﹣80 ℃； —— 冻存管梯度降温完成后转移至﹣80 ℃冰箱或液氮罐的长期保存区。 6.2.4 冻存合格检测标准 冻存24 h后，取同一批次冻存的线虫，在37 ℃半融化后，迅速转移到线虫生长培养基（NGM）培养 皿中观察，复苏后的线虫存活率应高于20％。 6.2.5 保种年限 根据需求，宜选择以下方式进行保存： —— 在﹣80 ℃冰箱能保存 10年； —— 在液氮中能长期保存。 7 繁育 自体受精繁育 线虫有雄性及雌雄同体两种性别。雌雄同体虫既能产生精子，又能产生卵子，可以在无雄虫存在的