(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210556165.1 (22)申请日 2022.05.19 (71)申请人 南方医科 大学皮肤病医院 （广东省 皮肤病医院、 广东省皮肤 性病防治 中心、 中国麻风防治研究中心） 地址 510000 广东省广州市越秀区麓 景路2 号 (72)发明人 邓成成　杨斌　荣知立　徐雪艳　 朱定衡　张莉雪　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 姚大雷 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6809(2018.01)C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种组合物、 用途及基因综合筛 选方法 (57)摘要 本发明提供一种组合物、 用途及基因综合筛 选方法。 其中， 所述组合物应用于针对瘢痕疙瘩 易感性的筛选和检测， 包括： 易感位点引物组和 易感基因长链非编码RNA引物组。 本发明所提供 的组合物结合了易感位点基因型和易感基因表 达两个指标， 相对于常规方法中只用样本进行单 个易感位点的基因筛选和检测， 其筛选和检测的 准确性显著提高。 权利要求书2页 说明书11页 序列表2页 附图7页 CN 115198008 A 2022.10.18 CN 115198008 A 1.一种组合物， 应用于针对瘢痕疙瘩易感性的筛选和检测， 其特征在于， 包括： 易感位 点引物组和易感基因长链非编码RNA引物组； 优选地， 所述 易感位点引物组为针对于易感位 点rs1348270的所述 易感位点引物组； 优选地， 所述易感基因长链非编码RNA引物组为针对长链非编码RNA  TCONS_L2_ 00002779的所述 易感基因长链非编码RNA引物组。 2.如权利要求1所述组合物， 其特征在于， 所述易感位点引物组包括与所述易感位点 rs1348270对应的扩增引物中的PCR上游引物和PCR下游引物。 3.如权利要求2所述组合物， 其特征在于， 所述PCR上游引物为如SEQ  ID No.1所示的所 述PCR上游引物； 所述PCR下游引物为如SEQ  ID No.2所示的所述PCR下游引物。 4.如权利要求1所述组合物， 其特征在于， 所述易感基因长链非编码RNA引物组包括 TCONS_L2_0 0002779引物对和内参GAP DH引物对； 优选地， 所述TCONS_L2_00002779引物对包括TCONS_L2_00002779上游引物和TCONS_ L2_00002779下游引物； 所述TCONS_L2_00002 779上游引物为如SEQ  ID No.3所示的TCONS_L2_00002 779上游引 物； 所述TCONS_L2_00002 779下游引物为如SEQ  ID No.4所示的TCONS_L2_00002 779下游引 物； 优选地， 所述内参GAP DH引物对 包括GAPDH上游引物和GAP DH下游引物； 所述GAPDH上游引物为如SEQ  ID No.5所示的所述GAP DH上游引物； 所述GAPDH下游引物为如SEQ  ID No.6所示的所述GAP DH下游引物。 5.一种如权利要求1 ‑4任一项所述组合物在制备针对于瘢痕疙瘩易感性风险的检测产 品/试剂盒中的用途。 6.一种基于 权利要求1 ‑4任一项所述组合物的基因综合筛 选方法， 其特 征在于， 包括： 基于所述组合物中的易感位点引物组， 对受试样品进行针对于rs1348270易感位点检 测， 得出第一检测结果； 并且， 基于所述组合物中的易感基因长链非编码RNA引物组， 对受试样品进行针对于所述长 链非编码RNA  TCONS_L2_0 0002779表达的检测， 得 出第二检测结果； 根据所述第一检测结果和所述第二检测结果确认筛 选结果。 7.如权利要求6所述基因综合筛选方法， 其特征在于， 所述基于所述组合物中的易感位 点引物组， 对受试样品进行针对于rs1348270易感位 点检测， 得 出第一检测结果， 包括： 基于所述 易感位点引物组， 利用DNA聚合酶对所述受试样品进行PCR扩增， 得第一产品； 利用琼脂 凝胶电泳鉴定所述第一产品中的产物是否存在、 产物位置和产物长度； 通过鉴定后， 对经 过琼脂凝胶电泳的所述第一产品进行 纯化回收， 得 纯化产品； 对所述纯化产品测序， 得 所述第一检测结果； 优选地， 所述第一检测结果 为： AA， A/G和G G三种结果中的一种。 8.如权利要求7所述基因综合筛选方法， 其特征在于， 所述基于所述组合物中的易感基 因长链非编码RNA引物组， 对受试样品进行针对于所述长链非编码RNA  TCONS_L2 _00002779 表达的检测， 得 出第二检测结果， 包括：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115198008 A 2基于所述 易感基因长链非编码RNA引物组， 对所述受试样品进行扩增， 得到第二产品； 利用荧光定量PCR仪对所述第二产品进行分析， 得 所述第二检测结果。 9.如权利要求8所述基因综合筛选方法， 其特征在于， 所述利用荧光定量PCR仪对所述 第二产品进行分析， 得 所述第二检测结果， 包括： 利用荧光定量PCR仪计算所述第二产品对应的Δ Ct值， 作为所述第二检测结果； 所述ΔCt值的计算方法为： Δ Ct＝CtTCONS_L2_0 0002779‑CtGAPDH； 其中， CtGAPDH为所述荧光定量PCR仪计算得出的GAPDH的Ct值， CtTCONS_L2_00002779为所述荧 光定量PCR仪计算得 出的TCONS_L2_0 0002779的Ct值。 10.如权利要求9所述基因综合筛选方法， 其特征在于， 所述根据所述第一检测结果和 所述第二检测结果确认筛 选结果， 包括： 取所述受试样品对应的所述第 一检测结果和所述第 二检测结果进行分析， 若所述第 一 检测结果为GG， 并且所述第二检测结果中为ΔCt≥ΔCt参考， 则基因综合筛选的筛选结果为 筛选成功； 优选地， 所述预设参 考值的计算方法包括： 设置对照群组， 检出所述对照 群组中每个对照样本的ΔCt值； 其中， 所述对照群组中的 对照样本的数量 不少于50； 计算所述对照 群组中所有所述对照样本的ΔCt值的中位数， 并将所述中位数作为所述 预设参考值ΔCt参 考。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115198008 A 3