(19)国家知识产权局
(12)发明 专利申请
(10)申请公布号
(43)申请公布日
(21)申请 号 202210556165.1
(22)申请日 2022.05.19
(71)申请人 南方医科 大学皮肤病医院 (广东省
皮肤病医院、 广东省皮肤 性病防治
中心、 中国麻风防治研究中心)
地址 510000 广东省广州市越秀区麓 景路2
号
(72)发明人 邓成成 杨斌 荣知立 徐雪艳
朱定衡 张莉雪
(74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务
所(特殊普通 合伙) 11463
专利代理师 姚大雷
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6883(2018.01)
C12Q 1/6809(2018.01)C12Q 1/6851(2018.01)
C12N 15/11(2006.01)
(54)发明名称
一种组合物、 用途及基因综合筛 选方法
(57)摘要
本发明提供一种组合物、 用途及基因综合筛
选方法。 其中, 所述组合物应用于针对瘢痕疙瘩
易感性的筛选和检测, 包括: 易感位点引物组和
易感基因长链非编码RNA引物组。 本发明所提供
的组合物结合了易感位点基因型和易感基因表
达两个指标, 相对于常规方法中只用样本进行单
个易感位点的基因筛选和检测, 其筛选和检测的
准确性显著提高。
权利要求书2页 说明书11页
序列表2页 附图7页
CN 115198008 A
2022.10.18
CN 115198008 A
1.一种组合物, 应用于针对瘢痕疙瘩易感性的筛选和检测, 其特征在于, 包括: 易感位
点引物组和易感基因长链非编码RNA引物组;
优选地, 所述 易感位点引物组为针对于易感位 点rs1348270的所述 易感位点引物组;
优选地, 所述易感基因长链非编码RNA引物组为针对长链非编码RNA TCONS_L2_
00002779的所述 易感基因长链非编码RNA引物组。
2.如权利要求1所述组合物, 其特征在于, 所述易感位点引物组包括与所述易感位点
rs1348270对应的扩增引物中的PCR上游引物和PCR下游引物。
3.如权利要求2所述组合物, 其特征在于, 所述PCR上游引物为如SEQ ID No.1所示的所
述PCR上游引物;
所述PCR下游引物为如SEQ ID No.2所示的所述PCR下游引物。
4.如权利要求1所述组合物, 其特征在于, 所述易感基因长链非编码RNA引物组包括
TCONS_L2_0 0002779引物对和内参GAP DH引物对;
优选地, 所述TCONS_L2_00002779引物对包括TCONS_L2_00002779上游引物和TCONS_
L2_00002779下游引物;
所述TCONS_L2_00002 779上游引物为如SEQ ID No.3所示的TCONS_L2_00002 779上游引
物;
所述TCONS_L2_00002 779下游引物为如SEQ ID No.4所示的TCONS_L2_00002 779下游引
物;
优选地, 所述内参GAP DH引物对 包括GAPDH上游引物和GAP DH下游引物;
所述GAPDH上游引物为如SEQ ID No.5所示的所述GAP DH上游引物;
所述GAPDH下游引物为如SEQ ID No.6所示的所述GAP DH下游引物。
5.一种如权利要求1 ‑4任一项所述组合物在制备针对于瘢痕疙瘩易感性风险的检测产
品/试剂盒中的用途。
6.一种基于 权利要求1 ‑4任一项所述组合物的基因综合筛 选方法, 其特 征在于, 包括:
基于所述组合物中的易感位点引物组, 对受试样品进行针对于rs1348270易感位点检
测, 得出第一检测结果; 并且,
基于所述组合物中的易感基因长链非编码RNA引物组, 对受试样品进行针对于所述长
链非编码RNA TCONS_L2_0 0002779表达的检测, 得 出第二检测结果;
根据所述第一检测结果和所述第二检测结果确认筛 选结果。
7.如权利要求6所述基因综合筛选方法, 其特征在于, 所述基于所述组合物中的易感位
点引物组, 对受试样品进行针对于rs1348270易感位 点检测, 得 出第一检测结果, 包括:
基于所述 易感位点引物组, 利用DNA聚合酶对所述受试样品进行PCR扩增, 得第一产品;
利用琼脂 凝胶电泳鉴定所述第一产品中的产物是否存在、 产物位置和产物长度;
通过鉴定后, 对经 过琼脂凝胶电泳的所述第一产品进行 纯化回收, 得 纯化产品;
对所述纯化产品测序, 得 所述第一检测结果;
优选地, 所述第一检测结果 为: AA, A/G和G G三种结果中的一种。
8.如权利要求7所述基因综合筛选方法, 其特征在于, 所述基于所述组合物中的易感基
因长链非编码RNA引物组, 对受试样品进行针对于所述长链非编码RNA TCONS_L2 _00002779
表达的检测, 得 出第二检测结果, 包括:权 利 要 求 书 1/2 页
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CN 115198008 A
2基于所述 易感基因长链非编码RNA引物组, 对所述受试样品进行扩增, 得到第二产品;
利用荧光定量PCR仪对所述第二产品进行分析, 得 所述第二检测结果。
9.如权利要求8所述基因综合筛选方法, 其特征在于, 所述利用荧光定量PCR仪对所述
第二产品进行分析, 得 所述第二检测结果, 包括:
利用荧光定量PCR仪计算所述第二产品对应的Δ Ct值, 作为所述第二检测结果;
所述ΔCt值的计算方法为: Δ Ct=CtTCONS_L2_0 0002779‑CtGAPDH;
其中, CtGAPDH为所述荧光定量PCR仪计算得出的GAPDH的Ct值, CtTCONS_L2_00002779为所述荧
光定量PCR仪计算得 出的TCONS_L2_0 0002779的Ct值。
10.如权利要求9所述基因综合筛选方法, 其特征在于, 所述根据所述第一检测结果和
所述第二检测结果确认筛 选结果, 包括:
取所述受试样品对应的所述第 一检测结果和所述第 二检测结果进行分析, 若所述第 一
检测结果为GG, 并且所述第二检测结果中为ΔCt≥ΔCt参考, 则基因综合筛选的筛选结果为
筛选成功;
优选地, 所述预设参 考值的计算方法包括:
设置对照群组, 检出所述对照 群组中每个对照样本的ΔCt值; 其中, 所述对照群组中的
对照样本的数量 不少于50;
计算所述对照 群组中所有所述对照样本的ΔCt值的中位数, 并将所述中位数作为所述
预设参考值ΔCt参 考。权 利 要 求 书 2/2 页
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专利 一种组合物、用途及基因综合筛选方法
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