SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4780—2017 出口食品腐败酵母菌 实时荧光PCR检测方法 Detection of spoilage yeasts in food for export-Real-time PCR method 行业标准信息服务平台 2017-05-12发布 2017-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4780—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：付溥博、郭铮蕾、韩玥、徐娜、饶红、王传现、刘夏、李晓虹。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4780—2017 出口食品腐败酵母菌 实时荧光PCR检测方法 1范围 本标准规定了出口食品中鲁氏结合酵母菌（Zygosaccharomycesrouii）、酿酒酵母菌（Saccharo mycescerevisiae）和酒香酵母菌（Brettanomycesspp.）的实时荧光PCR检测方法。 本标准适用于出口食品中鲁氏结合酵母菌、酿酒酵母菌和酒香酵母菌的实时荧光PCR检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 腐败酵母菌Spoilageyeasts 腐败酵母菌是指在食品中生长而引起食品腐败变质的一类酵母菌。腐败酵母菌会分解食品的糖、 胶质、淀粉和脂肪，产生二氧化碳、硫化物，或引起食物酸化，从而导致食品腐败。鲁氏结合酵母菌、酿酒 酵母菌和酒香酵母菌均为重要的导致食品腐败的酵母菌 3.2 鲁氏结合酵母菌Zygosaccharomycesrouxii 鲁氏结合酵母菌（Zygosaccharomycesrouaii）属于挪孢酵母科，鲁氏结合酵母属。鲁氏结合酵母菌 在麦芽汁琼脂上菌落呈奶油色，稍有光泽，质地软而平滑，卵形或球形。 注：鲁氏结合酵母菌是最常见的嗜高渗透压酵母菌。既是主要传统发酵食品的生产菌，又是引起某些低水分活度食 品及原料的腐败菌。如：鲁氏结合酵母菌是生产酱油、日本味噜和泰国发酵鱼制品等发酵制品的重要菌种。在 果汁、果酱、软饮料、沙拉酱和调味番茄酱等中则是腐败菌。 3.3 酿酒酵母菌 Saccharomycescerevisiae 酿酒酵母菌（Saccharomycescereuisiae）属于酵母菌科，酿酒酵母菌属。单细胞，卵圆形或球形，具 细胞壁、细胞质膜、细胞核、液孢、线粒体。细胞大小为2.5μm~10μm×4.5μm~21μm。酿酒酵母菌 在孟加拉红培养基上光滑、湿润，呈红色、粉红或白色蜡样菌落，常带黏性。酿酒酵母菌又称面包酵母或 者出芽酵母，常常存在于蔬果汁饮料中，从而引起饮料的腐败 1 SN/T 4780—2017 3.4 酒香酵母菌Brettanomycesspp. 酒香酵母菌（Brettanomycesspp.）属于隐球酵母菌科，酒香酵母菌属。酒香酵母菌的菌落特征为乳 白色、圆形、中央凸起、边缘扁平、表面湿润光泽、粘稠易挑起，有轻微的酱香味，主要以出芽方式繁殖。 注：酒香酵母菌属中的布鲁塞尔酒香酵母菌（Brettanomycesbrurellensis）会引葡萄酒风味劣变。在酿造葡萄酒过程 中，酒香酵母菌在酒体中产生的4-乙基苯酚（4-Ethylphenol，4-EP）和4-乙基愈创木酚（4-Ethylguaiacol，4-EG）： 能产生一种典型的“马既味”不良风味。在低浓度时，这些物质可以对葡萄酒的香气产生有利的影响，增加许多 特别的风味，但浓度一旦变高，就会产生不愉快的气味，降低葡萄酒的香气和口感，影响葡萄酒的经济价值。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction） Ct值：循环阅值（Cyclethreshold） DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleicacid) FAM:6-羧基荧光素（6-carboxy-fluorescein） TAMRA：6-羧基四甲基罗丹明（Tetramethylrhodamin） BHQ：黑洞萍灭基团（BlackHoleQuencher） MGB：小沟结合物探针（MinorGrooveBinder） 5 生物安全要求及防污染措施 5.1 1检测工作中的个人防护按照GB19489。 5.2 2使用过的实验用品应遵照GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理。 5.3 检测过程中防止交叉污染的措施按照GB/T27403执行。 6 仪器和设备 6.1 荧光定量PCR仪。 高速台式离心机：最高离心力不低于15000×g。 6.2 6.3 生物安全柜或超净工作台。 6.4 息服务平台 6.5 恒温培养箱。 6.6 涡旋振荡器。 6.7 紫外灭菌灯。 6.8 高压灭菌锅。 6.9 接种环。 6.10移液器及对应吸头：10μL、100μL、200μL、1000μL。 6.11PCR反应管。 7试剂 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。所有试 2