ICS 65.020 SN B 16 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4877.14—2019 基因条形码筛查方法 第14部分：检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒 DNA barcoding screening method-Part 14: Qurantine Sobemoviruses 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T 4877.14—2019 前言 SN/T4877《基因条形码筛查方法》分为15个部分： 一第1部分：检疫性棒形杆菌； 一第2部分：检疫性黄单胞菌； 一第3部分：检疫性植原体； 一第4部分：检疫性茎点霉； 一第5部分：检疫性拟茎点霉； 第6部分：检疫性嗜酸菌； 一第7部分：检疫性轮枝菌； 一第8部分：检疫性炭疽菌； 一第9部分：检疫性腥黑粉菌； 一第10部分：检疫性疫霉； 一第11部分：检疫性异株苋亚属； 一第12部分：黄瓜绿斑驳花叶病毒弓 一第13部分：检疫性马铃薯Y病毒属病毒； 文本为准 一第14部分：检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒 第15部分：检疫性叶点霉。 本部分为SN/T4877的第14部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国北京海关，中华人民共和国厦门海关。 本部分主要起草人：邓丛良，陈红运、赵晓丽、吕玉峰骆卫峰、刘兴亮、郑春生。 信息服务平台 SN/T 4877.14—2019 基因条形码筛查方法 第14部分：检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒 1范围 本部分规定了检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒的基因条形码筛查方法中RNA提取、基因扩增、序 列的比对分析及结果判定等。 本部分适用于植物繁殖材料及植物产品中检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒的筛查检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T3438南方菜豆花叶病毒检疫鉴定方法。 SN/T3436藜草花叶病毒检疫鉴定方法。 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 DNA条形码（DNAbarcode） DNA条形码是指生物体内能够代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA 片段。 标准信息 4南方菜豆花叶病毒属基本信息 V 中文名称：南方菜豆花叶病毒属 学名：genus Sobemovirus 该属病毒可侵染单子叶植物和双子叶植物，但每个病毒的自然寄主范围相对窄，病害症状主要是花 叶和斑驳。该属有13个种和3个暂定种，该属病毒包括南方菜豆花叶病毒（Southernbeanmosaic uirus，SBMV）和藜草花叶病毒（Sorebanemosaicvirus，SoMV）等2种检疫性植物病毒。有关该病毒 属的其他信息参见附录A。 5原理 南方菜豆花叶病毒属（Sobemovirus）的成员为正义单链RNA病毒。病毒复制酶基因的保守区域 即为该属的条形码特征序列，根据此保守区域设计简并引物，进行RT-PCR扩增和PCR产物测序，实 现对Sobemooirus病毒的筛查检测。 1 SN/T 4877.14—2019 6仪器和试剂 6.1仪器与设施 温冰箱、普通冰箱、离心机等；微量移液器（2.5μL，10μL，20μL，100μL，200uL，1000μL）；酶联板、研 钵等；隔离温室。 6.2试剂 试剂见附录B。 7制样 挑取畸形、不成熟的种子播于灭菌土中，待长出3-4片真叶后将表现症状的植株编号，未表现症状 的植株分组（10株为1组）并编号。 8DNA条形码筛查 分别提取样品和对照的总RNA，反转录合成cDNA后，进行PCR扩增。健康的植物组织作阴性对 照，感染SBMV的植物组织作阳性对照，用无菌水作空白对照 具体操作见附录B。 9 结果判定 9.1通用RT-PCR方法检测结果为阴性，则判定未检出南方菜豆花叶病毒属病毒。 9.2通用RT-PCR方法检测结果为阳性，则进行序列测定与分析： a）如果翻译后氨基酸序列与南方菜豆花叶病毒属已知病毒序列（参见附录C)同源性大于95%， 则判定检出南方菜豆花叶病毒属病毒（具体病毒种类还需采用其他方法进一步鉴定）。 b）如果翻译后氨基酸序列与南方菜豆花叶病毒属已知病毒序列同源性低于95%： 如果系统发育分析表明与南方菜豆花叶病毒属病毒聚为一群则判定检出南方菜豆花叶 病毒属病毒（具体病毒种类还需采用其他方法进一步鉴定）； 注：所检测到的病毒可能属于基因组序列尚未测定的已知病毒或尚未报道的新的病毒种类。 如果系统发育分析表明与南方菜豆花叶病毒属病毒未聚为一群，则判定未检出南方菜豆 花叶病毒属病毒。 c）如果测定的基因组序列与南方菜豆花叶病毒属中的SBMV和SoMV病毒同源性最高，则判定 筛查出检疫性植物病毒，需要根据标准方法（SN/T3438和SN/T3436）进行最终鉴定。 10样品保存、结果记录与资料保存 10.1结果记录与资料保存 记录样品信息和检测数据，包括样品来源、植物种类、取样时间与地点，检测时间、方法和结果以及 2