ICS 11.020 SN C 62 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5107—2019 出入境口岸蚊媒传染病多种 病原体基因悬浮芯片检测方法 A multiplex liquid bead array for detecting mosquito-borne diseases of multiplex pathogens at entry-exit ports 行业标准信息服务平台 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5107—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国石家庄海关。 本标准主要起草人：李云、史玲莉、闫冀焕、沈军、李薇、兰景、付晓昀 行业标准信息服务平台 SN/T5107—2019 出入境口岸蚊媒传染病多种 病原体基因悬浮芯片检测方法 1范围 本标准规定了用于出人境口岸快速筛查黄热病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、登革 病原体的基因悬浮芯片筛查方法。 本标准适用于国境口岸入出境人员或蚊类携带以上六种病原体的筛查。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T2788医学媒介生物样品保存与运送要求 WS233微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 蚊媒传染病Mosquito-bornediseases 是由病媒蚊子传播的自然疫源性疾病，常见的有日本脑炎、疮疾、登革热、丝虫病、黄热病等危害性 较强的传染病。 3.2 基因悬浮芯片 genesuspensionarray 利用带编码的微球体作为载体，流式细胞仪作为检测平台，对核酸进行大规模测定的一种生物芯片 技术。 4 生物安全防护要求 4.1实验室应遵循GB19489和WS233对生物安全Ⅱ级（BSL-2)实验室的生物安全要求。 4.2使用过的实验用品应遵照GB19489的要求，对废弃物应进行无害化处理。 5对象 5.1出入境口岸截获的来自蚊媒传染病流行国家或地区人员的可疑病例样本。 5.2出入境口岸截获来自蚊媒传染病流行国家或地区的蚊类样本。 1 SN/T 5107—2019 6样本的采集、保存和运送 6.1样本采集 6.1.1采集来自于疫区的人员、出入境可疑人员、申请检验人员的血液。 6.1.2采集来自疫区的藏匿于交通工具、运输设备中的蚊类或以其他方式藏匿的蚊类样本。 6.2样本的送检和处理 6.2.1蚊类样本：将采集的蚊类直接放入一20℃冰箱冻死后，取出，分类编号，按30只一份，装入2m 螺口塑料管内，于一70℃运输或保存待检。 6.2.2血清和血浆：用无菌注射器直接吸取至无菌离心管中处理，编号备用。 7主要设备与试剂 7.1主要设备 悬浮芯片系统、荧光显微镜、水平电泳仪、凝胶成像系统、离心机、PCR仪、生物安全柜、移液器、核 酸蛋白检测仪、真空泵、涡流振荡仪。 7.2主要试剂 MEM和Hank's液、标本处理液（见附录A中A.1）、PCR反应液（见附录A中A.2）、氯化四甲铵 （TMAC)、1.5XTMAC杂交液（见附录A中A.3）、1XTMAC杂交液（见附录A中A.4）、羧基化编 码微球（BioRad公司）、2［N-吗啉I乙磺酸（MES)（pH4.5）、1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸 盐（EDC）、SDS、N-十二烷基肌氨酸钠、TE（pH8.0)（见附录A中A.5）、链亲和素-藻红蛋白（SA-PE）、乙 标准信息服务平 树脂Chelex100。 8检测方法 8.1DNA提取 8.1.1 从血样本中提取原虫DNA的方法 8.1.1.1取20μL全血放人1.5mL离心管内。 8.1.1.2加200μL预热的5%Chelex100，100℃加热10min，期间振荡3次~5次。 8.1.2 从蚊类样本中提取症原虫DNA的方法 8.1.2.1将待检蚊类样本在组织研磨器中研磨或电动匀浆机中匀浆20s~30s，使样品匀浆成糊状， 12000g离心3min，取上清液作为样品。 8.1.2.2加入150μL重蒸水和50μL的20%Chelex100，95℃加热10min，以提取DNA。 8.1.2.3在加热过程中，每2min涡旋一次。 备用。 2