SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4675.28—2016 出口葡萄酒中细菌、霉菌及酵母的计数 Enumeration of bacteria,moulds and yeasts in wine for export 行业标准信息服务平台 2016-12-12发布 2017-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4675.28—2016 前言 SN/T4675《出口葡萄酒质量安全分析方法》共分为30个部分： SN/T 4675.1 出口葡萄酒中甘油的测定酶法； SN/T 4675.2 出口葡萄酒中2,3-丁二醇的测定气相色谱法； SN/T4675.3 出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定； -SN/T4675.4 出口葡萄酒中乳酸的测定酶法； SN/T4675.5 出口葡萄酒中有机酸的测定离子色谱法； -SN/T4675.6 出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定； SN/T 4675.7 出口葡萄酒中乙醛的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.8 出口葡萄酒中5-羟甲基糠醛的测定液相色谱法； SN/T4675.9 出口葡萄酒中二甘醇的测定气相色谱-质谱法； SN/T 4675.10 出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.11 出口葡萄酒中7种花色苷的测定超高效液相色谱法； SN/T4675.12 出口葡萄酒中溶菌酶的测定液相色谱法； SN/T 4675.13 出口葡萄酒中2，4，6-三氯苯甲醚残留量的测定气相色谱-质谱法； SN/T4675.14 出口葡萄酒中纳他霉素的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.15 出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法； SN/T 4675.16 出口葡萄酒中富马酸的测定液相色谱-质谱/质谱法； SN/T 4675.17 出口葡萄酒中丁基锡含量的测定气相色谱-质谱/质谱法； SN/T4675.18 出口葡萄酒中 硫代氨基甲酸酯残留量的测定顶空气相色谱法； SN/T 4675.19 出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定； SN/T 4675.20 出口葡萄酒中稀土元素的测定电感耦合等离子体质谱法： SN/T 4675.21 出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定离子色谱法； SN/T 4675.22 出口葡萄酒中总二氧化硫的测定比色法； SN/T4675.23 出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定连续流动分析仪法； SN/T4675.24 出口葡萄酒福林-肖卡指数的测定分光光度计法； SN/T 4675.25 出口葡萄酒颜色的测定CIE1976（L*a*b*）色空间法； SN/T 4675.26 出口葡萄酒浊度的测定散射光法； SN/T4675.27 出口葡萄酒碱性灰分的测定； SN/T4675.28 出口葡萄酒中细菌、霉菌及酵母的计数； SN/T4675.29 出口葡萄酒中酒香酵母检验实时荧光PCR法； 出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验实时荧光PCR法。 SN/T4675.30 本部分为SN/T4675的第28部分 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局，中华人民共和国广东出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人：韩伟、谢小珏、刘夏、张旺、凌莉、李志勇、刘青、席静 SN/T4675.28—2016 出口葡萄酒中细菌、霉菌及酵母的计数 1范围 SN/T4675的本部分规定了葡萄酒中细菌、霉菌及酵母的计数方法， 本部分适用于各种葡萄酒中细菌、霉菌及酵母的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 3原理 葡萄酒样通过孔径为0.45um的滤膜进行抽滤，将葡萄酒中活的微生物（细菌、霉菌及酵母）截留在 滤膜上，通过在适当的培养基上培养，直接计数。 4设备和材料 4 除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 4.1滤器。 4.2 滤膜：微孔径为0.45um 业标准 4.3 抽滤设备。 4.4 无菌镊子。 4.5 培养箱：30℃±1℃。 4.6 冰箱：2℃~8℃。 4.7 pH计：具有温度补偿功能，在25℃精确校准到士0.1单位 无菌吸管：1.0mL和10.0mL,分刻度分别为0.1ml.和1.0mL 服务平台 4.8 4.9 无菌培养皿：直径90mm。 4.10 放大镜和（或）菌落计数器。 5 培养基和试剂 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水应符合GB/T6682的相关要求 5.1 WLD培养基：见附录A的A.1。 5.2M-Green培养基：见A.2。 5.3无水乙醇。 5.4联苯。 1 SN/T 4675.28—2016 6计数检测 6.1 检测程序 检测程序见图1。 将样品进行10倍梯度稀释，取适宜的2个~3个连续稀释梯度 每个稀释度取100mL 抽滤 细菌计数 霉菌及酵母计数 将滤膜移放在WLD琼脂培养基上 将滤膜移放在M-Green琼脂培养基上 30℃±1℃，培养72h±3h 30℃±1℃，培养72h±3h 对菌落进行计数 对菌落进行计数 行业标焦 图1检测程序 6.2试样制备 将样品10倍梯度稀释后，取2个～3个适宜的连续稀释梯度，然后用100mL样品稀释液进行抽 信息服务 滤；也可以取100mL原液直接进行抽滤。 6.3葡萄酒中细菌的计数检测 6.3.1 滤膜的前处理 如滤膜未经灭菌，则使用前需先将滤膜放入烧杯中，加人蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次 15min。前两次煮沸后需更换水，用蒸馏水洗涤2次～3次，以除去残留溶剂。建议使用一次性无菌 滤膜。 6.3.2抽滤 用无菌镊子夹取无菌滤膜边缘部分，将正面向上，贴放在以灭菌的滤床上，固定好滤器，将100mL 葡萄酒原液或稀释液注人滤器中，打开滤器阀门，在一5.07×10°Pa（负0.5大气压）下抽滤。