SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4793—2017 国境口岸疟原虫实时荧光PCR检测方法 Test methods for Plasmodium by real time PCR at ports 行业标准信息服务平台 2017-05-12发布 2017-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4793—2017 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国汕头出人境检验检疫 局、中华人民共和国广州机场出入境检验检疫局 本标准主要起草人：师永霞、李小波、朱俊贤、李燕、黄吉城、幸芦琴、洪烨、孙薇、钟玉清、相大鹏。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4793—2017 国境口岸疮原虫实时荧光PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸症疾检测的生物安全要求，标本的采集、运输和保存，症疾实时荧光PCR检 测方法。 本标准适用于国境口岸入出境疑似恶性症、间日疮、卵形症和三日症感染对象的实时荧光PCR 检测。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 人间传染的病原微生物名录（卫科教发【200615号） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 症疾 malaria 由人类疟原虫感染引起的寄生虫病，主要由雌性按蚊叮咬传播。原虫先侵人肝细胞发育繁殖，再 侵人红细胞繁殖，引起红细胞成批破裂而发病。临床上以反复发作的间歇性寒战、高热、继之出大汗后 缓解为特点。 3.2 症原虫 Plasmodium 属于真球虫目（Eucoccidida）、疟原虫科（Plasmodidae）、症原虫属（Plasmodium），是症疾的病原 体。寄生于人类的痣原虫有4种，即间日症原虫（Plasmodiumvivar）、恶性症原虫（Plasmodiumfalci- 服务平台 parum）、三日原虫（Plasmodiummalariae）及卵形疟原虫（Plasmodiumovale），分别引起间日症、恶 性症、三日症和卵形疮。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 实时荧光RT-PCR：实时荧光反转录-聚合酶链反应。 Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 DNA:脱氧核糖核酸。 FAM:FAM荧光染料，一种荧光报告基团。 SN/T 4793—2017 5生物安全要求 进行。 6人抗凝血清标本的采集、运输和保存 无菌采集疑似病例静脉血3mL5mL至2%EDTA-Naz抗凝管，用耐低温油性记号笔记上编号， 低温冷链送到实验室检测。如24h内不能送到实验室，一20℃低温保存。实验室接到样本后，应尽快 进行检测，并避免反复冻融 主要仪器 7 本方法使用的主要仪器包括： 荧光定量PCR仪； 超净工作台； IIA级生物安全柜； 高压灭菌锅； 低温高速离心机（最大离心力20000Xg）； 漩涡振荡器； 冰箱（4℃、-20℃和-70℃）； 移液器等。 8主要试剂 本方法使用的主要试剂包括核酸提取试剂，如Qiagen公司的QIAampDNABloodExtraction Minikit提取疮原虫核酸、实时夷光PCR通用试剂如中国CYbio公司的HRQpcrMasterMix，染料 掺人法荧光PCR试剂如Qiagen公司的QuantiTectSYBRGreenPCRKit3”、无DNA酶的双蒸水、引物 和探针等，引物和探针序列见表1。 表1症原虫实时荧光PCR检测的引物和探针 引物/探针名称 序列（5"-3） 备注 Plas-FP AGTTAAGGGAGTGAAGACGATCAGA Plas-RP TCATCCAAMRCCTAGTCGGCATAGTTTAT 原虫通用 Plas-Pro FAM-ACCGTCGTAATCTT-MGB PF-FP CTTTTGAGAGGTTTTGTTACTTTGAGTAA PF-RP TATTCCATGCTGTAGTATTCAAACACAA 恶性 PF-Pro FAM-TGTTCATAACAGACGGGTAGTCATGATTGAGTTCA-BHQ1 1)，2)，3)由指定单位提供，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产 品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。