ICS 65.020.99 SN B 38 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5131—2019 方法 人参鉴定 区 Identification method of Panax ginseng C.A.Meyer 业标准信息服务平台 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T 5131—2019 前言 本标准依据国标GB/T1.1一2009起草编制。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 研究所。 本标准起草人：孙涛、孔德英、滕少娜、蒋丹、邓朝晖、姚辉。 业标准信息服务平台 SN/T5131—2019 人参鉴定方法 1范围 本标准规定了人参的DNA条形码检测鉴定方法。 本标准适用于中药材人参、饮片及其基原植物的检验鉴定，不适用于提取不到核酸的深加工产品和 粉未混合物。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 DNA条形码 DNAbarcode 出版文本为 DNA条形码是指生物体内能够代表该物种的，标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA 片段。 3.2 内转录间隔区InternalTranscribed SpacerITS 们在染色体上头尾相连、串联排列，相互之间由间隔区分隔。其中18S5.8S和28SrDNA基因组成一个 转录单元。三者高度保守，适合于较高等级水平的生物群体间的系统分析，其间的间隔区为内转录间隔 区（InternalTranscribedSpacer，ITS），由ITS1-5.8S-ITS2组成，由于进化相对迅速而具多态性，ITS2 序列被推荐为药用植物DNA条形码序列用于系统学研究。 4人参基本信息 中文名：人参 学名：Panax ginseng C.A.Meyer 五加科（Araliaceae）人参属（PanarL.）。 《中国药典》（2010版）描述人参本品为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根和根茎。 多于秋季采挖，洗净经晒干或烘干。栽培的俗称“园参”；播种在山林野生状态下自然生长的称“林下山 参”，习称“籽海”。 人参的其他资料参见附录A。 1 SN/T 5131—2019 5方法原理 采用DNA条形码标准方法流程，以ITS2序列为条码基因，将样品进行DNA提取一PCR扩增 测序一BLAST比对分析，根据人参的ITS2序列特征，对样品进行鉴定。 6仪器用具和试剂 6.1仪器 PCR扩增仪、紫外分光光度仪、电泳仪、凝胶成像系统、高速冷冻离心机、烘箱、高压灭菌锅、电子天 平（感量1/1000）、球磨仪或研钵、水浴锅、纯水仪、涡旋震荡器、冰箱、微量移液器（2μL，10μL,20μL， 100μL,200μL,1000μL）、1.5mL离心管、0.2mLPCR反应管。 6.2主要试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T6682要求。 CTAB提取液、Tris饱和酚、氯仿、异戊醇、异丙醇、75%乙醇、95%乙醇、RNaseA、液氮、10×PCR 缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）、EaTaq聚合酶、引物（见表1）DNAMarker、琼脂糖、溴化乙锭 (EB)。 检测方法 7.1样品的处理 7.2DNA提取 见附录B。 7.3 DNA纯度与浓度的测定 息服务平台 用核酸蛋白分析仪测定DNA的纯度与浓度，分别取得260nm和280nm处的吸收值，计算核酸的 纯度和浓度，计算公式如下： DNA纯度=OD260/OD280 DNA浓度=50XOD260μg/mL PCR级DNA溶液的OD260/OD280比值应为1.7~1.9。 7.4PCR检测 7.4.1 引物 人参DNA条形码方法鉴定PCR扩增引物序列见表1。 表1 引物序列 目标基因 引物名称 序列 条带大小 ITS2F ATGCGATACTTGGTGTGAAT ITS2 500bp ITS3R GACGCTTCTCCAGACTACAAT 2